子宫内膜异位症蛋白质组学研究.pdf

硕士论文 子宫内膜异位症的蛋白质组学研究 子宫内膜异位症的蛋白质组学研究 中文摘要 子宫内膜异位症(简称内异症，Endometriosis，EMs)是指具有生物学活 性的子宫内膜种植在子宫腔以外的组织中，主要临床症状表现为痛经、不孕、慢 性盆腔痛及性交痛等，是育龄期妇女常见病、多发病之一。据报道其发病率高达 3％．10％，且近年来有明显增高的趋势，其中30％．50％的内异症患者伴发不孕， 30％．58％的不孕症患者合并内异症，因而内异症对患者的身心健康及生活质量 有很大影响。此疾病虽是一种良性疾病，但却具有转移、种植等恶性行为。内异 症的发病机理尚未研究清楚，但多项研究表明与正常妇女相比内异症患者血清、 腹腔液中多种生化分子的表达均增高，如癌抗原CA．125、CAl9．9、抗子宫内膜 抗体以及某些细胞因子等，同时内异症患者的在位子宫内膜生化特性也发生了改 变。目前子宫内膜异位症诊断的金标准是腹腔镜检查结合病理学诊断，但可以代 替腹腔镜作为内异症诊断的简单、无创的金标准仍缺乏，临床有将上述表达变化 的生物学分子用作辅助诊断手段，但它们的敏感性和特异性不高，而且诊断界值 尚未确定，故仅具有临床参考价值。 随着人类基因组学研究的逐渐完成，生命科学的探索已经进入了后基因组时 代，即蛋白质组时代。蛋白质组学研究方法有很多种，与传统的研究手段相对， 这些方法具有高通量、高效率、高准确性等特点，目前已经被广泛应用于多方面 的研究。因此我们课题采用蛋白质组学的研究方法对内异症患者的血清以及在位 子宫内膜组织的蛋白质表达变化进行研究，以寻找与内异症发生、发展相关的蛋 白质，这将有助于内异症的诊断以及复发的预测。 eIlllancedl船er 表面增强激光解析离子．飞行时间质谱(sllrface of deSorptioll／ioIlization．timenight．m勰s 能对不同的生物粗样品快速地建立蛋白质谱或肽谱，已被广泛地以用于多种疾病 的研究。本研究应用SELDI．TOF．MS技术对子宫内膜异位症患者血清进行分析， 比较其与对照组血清中蛋白质表达的差异，应用差异蛋白建立内异症患者血清诊 断模型，旨在寻找血清中差异表达的蛋白质，探讨将他们作为内异症血清学诊断 指标的可能性。 本研究还应用了双向电泳(t、^，o．dimensionaLl 了内异症患者和对照妇女在位子宫内膜表达的差异蛋白，并对其进行质谱鉴定， 有助于内异症发生发展机理的进一步研究。 硕士论文 子宫内膜异位症的蛋白质组学研究 第一部分 子宫内膜异位症血清生物标记物的筛选及诊断模型的建立 目的：筛选子宫内膜异位症患者血清中与内异症发生、发展相关的生物标记 物，建立内异症的血清诊断模型，同时进一步探讨内异症发生、发展的分子机制。 方法：将所收集到的79例内异症患者和72例对照组妇女的血清，利用弱阳离 子交换蛋白质芯片(WCX2)，经表面增强激光解吸离子．飞行时间．质谱 (SELDI．ToF．MS)读取蛋白质谱，建立内异症血清蛋白质指纹图谱，按照月经 周期将样品分为增生期组和分泌期组两组，通过BiomarkerWizardSo胁are分别 比较增生期组和分泌期组中内异症患者和对照组血清之间蛋白质表达的差异，通 过BiomarkerPatt锄s Sofhvare(BPS)利用差异蛋白分别建立内异症的诊断模型 并对模型进行盲法验证。 结果： (1)对56例内异症和57例对照血清不分期所建立的蛋白指纹图谱 中，在M／Z 有统计学意义(p0．01)，内异症患者血清中上调的蛋白有11个，M／Z分别为 照组血清相比共检测到147个差异蛋白质，其中6个有统计学意义，内异症患者 生期两组间有196个表达差异蛋白质，3个有统计学意义，内异症组表达上调的 硕士论文 子宫内膜异位症的蛋白质组学研究 为90．9％(40Ⅲ)。 结论： 蛋白质芯片SEL