小鼠优势不成熟d8αlt;#39;+gt;dc防治gvhd保留gvl效应的机制研究.pdf

小鼠优势不成熟CD8Q+DC防治GVHD保留GVL效应的机制研究 小鼠优势不成熟CD8仅+DC防治GVHD 保留GVL效应的机制研究 专业 I临床检验诊断学 硕士牛 陈康 导师 曹开源副教授 中文摘要 研究背景 移植物抗宿主病(graR．verSus．hostdisease，GVHD)是同种异体骨髓／造血干 细胞移植(allo．BMT／SCT)最主要的并发症之一，严重影响着移植后的牛存时 间和生存质量。目前临床上GVHD的防治方法虽可将重症GVHD的发生率控制 在35％以下，但也相应地带来了许多严重的副作用，包括严重的免疫抑制，致死 性感染，白血病的复发等等，从而抵消了这些方法对原发病的治愈价值。因此， 如何有效的防治GVHD，同时保留移植物抗感染和移植物抗白血病 移植和移植免疫耐受研究中亟需解决的问题。 抗原提呈细胞中的树突状细胞(DC)除可以激活T细胞产生免疫应答以外， 也具有致免疫耐受的作用。DC按其来源可分为髓系DC(DCl)和淋巴系DC (DC2)；按其成熟程度可分为不成熟DC和成熟DC。成熟DCl具较强的免疫 激活作用，而不成熟的DCl具有产生免疫耐受的作用，然而无论是不成熟还是 成熟DC2均具有致免疫耐受作用。 制备DC主要采用CD34+的造血干细胞加细胞因子体外诱导的方法。本课 题组采用新方法制备的小鼠优势不成熟CD8Q+DC体外刺激同系淋巴细胞增殖 小鼠优势／fi成熟CD8a+DC防治GVHD保留GVL效应的机制研究 的能力弱；对同系或同种异基因MLR有抑制作用；且体内有预防GVHD，防止 白血病复发的作用。基于此研究结果进一步探讨优势不成熟CD8Q+DC同种异 体骨髓移植中的作用机制。 研究目的 1、阐明优势不成熟CD8Q+DC预防移植物抗宿丰病(GVHD)的机制。 2、通过体外实验探究优势不成熟CD8Q+DC在预防GVHD的同时是否保留 移植物抗白血病(GVL)的效应。 3、探讨优势不成熟CD8a+DC在预防GVHD保留GVL效应的同时，是否 具有移植物抗肿瘤(GVT)作用。 研究方法 红白血病细胞体内传代的动物模型。 小鼠前列腺癌细胞RM—l经反复冻融，超声裂解法提取细胞全抗原并测蛋白含 量。 Q+DC和成熟 取C57BL／6(H．26)小鼠的骨髓细胞，制备优势不成熟CD8 DC，于培养最后一天加入制备好的各全抗原冲击DC。 MTT法观察T细胞增殖情况。收集共培养上清，ELIsA法检测上清中细胞因子 的含量。根据T细胞增殖情况和细胞因子分泌情况探索最佳的杀伤实验条件。 抗原冲击后的优势不成熟CD8Q+DC细胞刺激同系T细胞活化增殖，LDH 释放法检测T细胞的杀伤功能。 小鼠优势小成熟CD8Q+DC防治GVHD保留GVL效应的机制研究 研究结果 GM—CS l、小鼠骨髓细胞以4×106／ml的培养密度，5n∥mlF，20n∥mlIL4， loon∥ml FIt3L的细胞因子组合，诱导第3天后产生的DC，CD8 SCF和25n∥ml Q+DC／总DC比例为91．52％，不成熟CD8Q+DC／总DC的比例为62．43％。细 胞表面低表达MHC II，几乎不表达协同刺激分子CD40、CD86，为优势不成熟 CD8Q+DC。 2、BALB／C小鼠脾细胞抗原冲击后优势不成熟CD8Q+DC与T细胞比例为 l：l时，不能有效的刺激T细胞增殖。这与对照组的成熟DC相比有统计学差异。 两组MLR上清中细胞因子分泌情况明显不同，优势不成熟CD8Q+DC组IL．10 的分泌明显高于成熟DC组。杀伤实验结果显示，效靶比为l：l时，抗原特异性T 细胞即能产生明显的杀伤作用，且Ag冲击浓度为5u∥ml杀伤率可达70％。 3、EL961 1红自血病细胞抗原冲击后优势不成熟C