小鼠形觉剥夺性视眼模型sonichedgehog信号通路的表达及干预研究.pdf

中义摘要 小鼠形觉剥夺性近视眼模型Sonic hedgehog信号通路 ． 的表达及干预研究 ， 中文摘要 —1上▲—jL．‘ 日{『舌 随着近视眼在全球的发病率不断上升，针对近视眼的发病机制及防治方法的 研究己成为全球公共卫生工作和防盲治盲的重点。目fji『有大量研究集中于寻找介 导近视眼发生的信号机制，这其中包括各种胚胎期调控眼球发育的信号通路。 Sonic 平在小鸡实验性近视模型中发生改变，因此推测Shh可能是调控近视眼发生的信 号通路之一。目前，对于Shh在近视眼发病机制中的作用，国内外尚缺乏系统性 的研究，本课题围绕Shh在小鼠形觉剥夺性近视眼模型中的作用展丌实验，目的 是进一步阐明近视眼的发病机制，探索近视眼防治的新方法。 第一部分：小鼠形觉剥夺性近视眼模型的建立 目的：探讨建立小鼠形觉剥夺性近视眼模型(form．deprivationmyopia，FDM) 的可行性。比较半透明膜法和眼睑缝合法诱导小鼠FDM的效果。 睑缝合组(n=36)和对照组(n=16)。小鼠开睑当天即予佩戴半透明膜眼罩或 缝合眼睑(均为单眼)。分别于形觉剥夺1周、2周和4周后验光、测量眼轴长度， 并取视网膜行光镜、电镜检查。 结果：形觉剥夺1周、2周及4周后，半透明膜组的遮盖眼与对侧眼的屈光度 差异分别为：．5．77±2．24D、．6．16±1．04D和．8．43±0．86D，眼轴差异分别为： 0．030±0．044mill、0．040+_0．074mm和0．071±0．088mm；三个时间点眼睑缝合组的 眼屈光度差异分别为：．0．10±1．25D、0．08±1．86D和O．30_+0．84D，跟轴差异分别为： 0．020±0．090 眼呤缝合法诱导的近视眼模型在屈光度及眼轴改变方面的差异均无统讨‘学意义， 4周时眼睑缝合法诱导的近视程度大于半透明膜法(f=2．59，一0．016)。与对照眼 相比，FDMI艮光镜下未见视网膜形态结构发生明显异常改变，电镜下发现FDM 中文摘要 眼视网膜感光细胞外节膜盘间距增大，排列紊乱。 结论：半透明膜法或眼睑缝合法均可在C57B／L6d、鼠中诱导出轴性FDM模 型，两种方法诱导FDM的效果相近。建立小鼠FDM模型是可行的。 第二部分：形觉剥夺性近视眼小鼠视网膜Sonic hedgehog信号通路 分子表达的研究 目的：研究Sonic 在FDM及『F常小鼠视网膜组织的表达情况。 方法：150只出生13．14天的C57B／L6小鼠随机分为形觉剥夺组和对照组各 75只。采用半透明膜法诱导FDM，分别于1周、2周及4周后验光并测量眼轴。 fluorescent reverse 转录聚合酶链反应(real．time quantitativetranscription chainreaction，real—time polymerase 视网膜组织、mRNA及蛋白水平的表达情况。 结果：免疫荧光染色发现Shh、Ptc．1及Gli．3在出生后的小鼠视网膜中主要 分布于神经节细胞层到外丛状层。Gli．3在非形觉剥夺眼的视网膜中主要分布于 神经节细胞的细胞浆中，而在FDM眼中则主要表达于神经节细胞的细胞核内。 根据荧光强度未能分辨FDM眼中上述各分子表达水平的变化。Real．timePCR及 mRNA 及蛋白的表达水平均升高，4周后无显著改变；形觉剥夺1周后FDM眼