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庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤机制研究 中文摘要 【目的】 探讨庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiralganglion cell，SGc)的损伤机制。 【方法】 取出生后2～6天昆明种乳小鼠耳蜗，利用酶消化和机械分离相结 合的方法分离出SGC，并进行体外培养。将培养4天的SGC用4％多聚甲醛室温固定 30min，以小鼠源神经纤维细丝蛋白(Neurofi 隆抗体作为一抗，按照SP法对所培养细胞进行免疫细胞化学染色，对SGC作出鉴 定。将培养第4天的细胞分为4组：空白对照组及3种浓度的庆大霉素干预组(庆 透射电镜观察以及凋亡效应蛋I刍Caspase一3免疫细胞化学染色，染色结果用图像 分析系统及SPSS统计学软件进行定量分析。 【结果】 SGC原代培养获得成功，一般有相对生长的两个突起，为典型的 双极神经元，经NF-L+H抗体免疫细胞化学染色，其胞质及突起均呈阳性反应，染 成棕黄色。在透射电镜下观察SGC超微结构，3种浓度的庆大霉素组SGC与空白对 照组相比，均出现明显的形态学改变，以细胞核和线粒体为著，这种改变与凋亡 相关。庆大霉素组SGC出现明显的凋亡效应蛋白Caspase-3阳性反应，与空白对照 组相比，有显著性差异，且随着庆大霉素浓度的增高，Caspase-3阳性反应程度 也升高。 【结论】 庆大霉素对小鼠耳蜗SGC有直接毒性作用，可导致SGC凋亡，线粒 体损伤在这一过程中可能具有重要意义。Caspase-3的激活参与了庆大霉素致SGC 凋亡过程。 【关键词】庆大霉素类螺旋神经节细胞，培养的显微镜检查，电子， 透射细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 3 ofthe mechanismofcultured Study injury spiral cellscells[romfromousemonsecoCllleacochleinduce aanalion 1by · ■ - gentamicin Abstract the mechanismin ion [Objective]Toexploreinjury spiralgangl cochlearinvitrocaused cells(S6C)ofmouse postnatal bygentamicin． SGCswereisolated acombinatorialof [Methods】 byusing approach andmechanical fromP2～6 mouse enzymaticdigestion separation Kunming 4 SGCswerefixed cochlear．After by days，cultured in andthen identificationwas room immunocytochemical temperature methodsofS-Pandthemonoclonal