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应用SELDI-1DF-MS技术筛选两种小鼠放射性肺损伤血清差异性蛋白质波谱 中文摘要 应用SELDI．TOF．MS技术筛选 两种小鼠放射性肺损伤血清差异性蛋白质波谱 专 业： 肿瘤学 硕士生： 胡 晓 导’师： 陈 明 教授 摘 要 背景：放射治疗在肺癌、乳腺癌、食管癌、纵隔肿瘤等胸部肿瘤的综合治 疗中有重要地位：以肺癌为例，所有肺癌患者中的61．O％在其病程某个时间点 需要接受放射治疗。对不可手术的IⅡA期及IⅡB期非小细胞肺癌，同期放化疗是 目前标准治疗模式；对局限期小细胞肺癌，放疗可以提高局控率及总生存率。 而放射性肺损伤是肺癌等胸部肿瘤放射治疗中的主要剂量限制性毒性，据统计， 接受胸部放疗的肺癌患者中，5％～20％在放疗后发生严重的放射性肺损伤，直 接影响患者生存质量，2．3％的患者死于放射性肺损伤。放射肿瘤学家们为预测 放射性肺损伤的发生从而个体化地指导放疗做了大量研究工作，建立了一些物 理模型如双肺V20、平均肺剂量(MLD)、NTCP模型以及寻找了一些生物标志 等，其中TGF．B是学者们研究得最多的生物标志物之一。但在临床应用中发现， 以双肺V20为参考，有些患者接受了安全域值内的照射，但也发生了Ⅲ～Ⅳ度 的放射性肺炎，而另一些患者受照明显超出安全域值，放射性肺炎却轻微。单 纯基于物理参数的NTCP模型不可能适用于所有患者。因此，寻找有效的生物 标记物，并将其与NTCP模型联用，就有可能使肺损伤的预测更为个体化。随 着人类基因组图谱绘制完成，生命科学的研究已经进入后基因组时代。蛋白质 是生命功能的具体执行者，机体的生理及病理状态在蛋白质水平均有所体现。 蛋白质组学研究已经成为后基因组时代研究的热门话题。 lI 应用SELDI．1oF．MS技术筛选两种小鼠放射性肺损伤血清差异性蛋白质波谱 中文摘要 目的：筛选两种对放射性肺损伤敏感性不同的小鼠胸部照射后随时间变化 的血清差异性蛋白质波谱。 材料与方法：成年雄性SPF(specmc enhancedlaSer mass 行时间质谱(Sur蠡lCe cation spectrometⅨSELDI-TOF-MS)系统、弱阳离子交换(、Ⅳeak 将两种品系各32只小鼠分别随机分为A^啊组(分别代表照射后O小时，1天，3天， 1周，2周，4周，9周及假照射处死取标本组)。每两只小鼠同时照射，照射剂量 8Gy／lF。如为照射后需立即取标本(O小时组)则每次照射1只小鼠。假照射组小 鼠经过与其他组小鼠相同的照射准备工作，而没有真正接受照射，随后立即取标 本作为对照组。两种品系试验组小鼠各7组，分别子照射后相应时间麻醉下以1“ 注射器针头直接从小鼠心脏取血，收集血清，．80℃冰箱保存，左肺取出后冻存 下观察病理组织学变化。蛋白芯片采用蛋白质芯片阅读机(PBSIIc型)读取数 据。采用Ciphergenprote协chip3．02自动采集数据，应用浙江大学肿瘤研究所设计 Data 的ZUCI．Prote∽hipA11alyzeSyStem软件包分析所得数据，各组小鼠血清的 蛋白质谱差异采用Bi0腻r wiz矾分析。数据进行统计处理采用Ciphergen 3．02分析软件，组间蛋白峰比较采用Smdent’sf检验，确定组间尸O．05 prote梳llip 时具有统计学意义。 结果：小鼠照射从第4周起可观察到小鼠胸部照射处皮肤毛色变白并逐渐 脱毛，尤其以C57BL／6J小鼠明显。两种小鼠肺组织切片后，进行形态学观察， C3H／He小鼠切片组织经HE染色，主要表现为随时间发展，血管腔呈现先扩张 充血，2周后恢复至基本正常；肺泡腔先有较多渗出物，1周后逐渐吸收；肺泡 间隔增宽，肺间质炎细胞浸润逐渐增多；经Masson’striCl啪me