急性白血病儿童髓间充质干细胞与脐血来源nk细胞的相互作用体内外初步实验研究.pdf

广州医学院硕士论文 急性白血病儿童骨髓间充质干细胞与脐血来源NK细胞的相互作用体内外初步实验研究 急性白血病儿童骨髓间充质干细胞与脐血来源 NK细胞的相互作用体内外初步实验研究 中文摘要 研究背景： 骨髓间充质干细胞（bone marrow messenchymal stem cells, MSCs ）是骨髓中 除了造血干细胞外的另一种成体干细胞。MSCs 不仅在体外可培养无限扩增而不 [1] [2] 丧失其多向分化潜能 ，并且具有支持造血及免疫调节的功能 ，被越来越多地 应用于血液肿瘤等恶性疾病的治疗，同时在再生医学及组织工程中也有广泛应用 前景。目前应用于临床的或者进行临床试验的骨髓 MSCs 包括异基因骨髓 MSCs [3] 及自体骨髓 MSCs 。然而，研究发现异基因骨髓 MSCs 归巢困难 ，而自体的 [4] MSCs 可有效归巢且自体的 MSCs 安全性高 ，经自体 MSCs 输注感染传染病的 机会少，因此人们也把更多的注意力放在自体的骨髓 MSCs 身上。对于白血病儿 童来说，临床应用的自体 MSCs 都是在白血病状态下采集，这种异常状态下的骨 髓 MSCs 回输是否安全呢？吴丽萍等人的研究结果表明[5] ，白血病患儿的骨髓 MSCs 在生物学特性方面与其他来源的骨髓 MSCs 无明显差异。但是白血病儿童 骨髓 MSCs 在分子水平及功能学上是否有改变是值得深入研究的。尤其是在功能 学上的研究不可忽视，例如：白血病儿童骨髓 MSCs 是否会有恶性选择及促进白 血病复发的作用呢？是否会减弱NK 、T 细胞等免疫因子的GVL 效应及清除MRD 的能力而增加白血病的复发率？这些疑问的解决是白血病儿童自体骨髓 MSCs 安全应用的前提。 NK 细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，是机体抗肿瘤、抗感染的第一 道天然防线。随着对 NK 细胞生物功能及活化机制的了解，NK 细胞在造血干细 胞/骨髓移植的辅助治疗及肿瘤过继性免疫治疗方面的作用倍受关注。然而，原 始来源的 NK 细胞含量少(外周血约占淋巴细胞的 5 ％－7 ％)，且目前尚缺乏有 效的体外扩增体系，所以 NK 细胞的广泛临床应用受到了限制。因此，探索 NK 3 广州医学院硕士论文 急性白血病儿童骨髓间充质干细胞与脐血来源NK细胞的相互作用体内外初步实验研究 细胞的体外高效扩增体系具有重要意义。 目前研究认为，MSCs 细胞具有免疫调节功能；有研究[6-8]发现 MSCs 细胞能 够抑制异体抗原或丝裂原刺激的 T 淋巴细胞的增殖。但 MSCs 对 T 细胞的这种 免疫抑制作用机制仍然未明。NK 细胞是固有免疫的主要效应细胞，在抗肿瘤抗 病毒感染中也同 T 细胞一样发挥着举足轻重的作用。目前研究认为MSCs 对异体 抗原或丝裂原刺激的 T 淋巴细胞起到免疫抑制的作用，那么，MSCs 对 NK 细胞 是否也有相似的影响呢？如果不是，MSCs 对 NK 细胞的作用又如何呢？目前这 方面的研究相关文献的报道不多，尤其是有关白血病儿童骨髓 MSCs 更鲜有报 道。 因此，带着这些疑问，我们在本课题组之前对白血病儿童骨髓MSCs 细胞的 生物学特性初步研究的基础上，分离纯化扩增脐血 NK 细胞，并采用 NOD/SCID 小鼠建立白血病模型，对白血病儿童骨髓 MSCs 与 NK 细胞的相互作用及对白血 病细胞 K562 的影响进行体内外的初步研究，为急性白血病儿童骨髓MSCs 及脐 血 NK 细胞在白血病免疫治疗中应用的后续研究做前哨性的探索。 目的：探讨从人脐血中分选及扩增高纯度 NK 细胞的优化技术