抑制补体激活对毒症大鼠作用的实验研究.pdf

摘要 摘要 目的 本实验拟采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症大鼠模型，通过使用补体 抑制剂眼镜蛇毒因子(CVF)抑制补体激活后观察脓毒症大鼠早期外周血细胞因 子释放及肺组织的变化，探讨抑制补体激活对脓毒症大鼠模型所产生的影响及 意义。 方法 1．动物分组 将144只清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法随机分为假手术组(A组)、 脓毒症组(B组)和CVF组(C组)三组，每组48只。各组按照标本采集点的 不同又分为术后2、4、8、12、16、24小时六个时间点亚组，每个时间点亚组8 只，采集标本结束后处死。假手术组动物仅开腹翻动盲肠后关腹并复苏，不结 扎穿孔盲肠，脓毒症组和CVF组均行盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型。 50u CVF组于术前24小时经大鼠阴茎背静脉注射CVFg／kg，假手术组和脓毒症 组则给予等量生理盐水。 2．实验动物模型制备 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型。步骤为：用质量分数为 3％的戊巴比妥钠按lml／kg腹腔注射麻醉大鼠成功后固定，腹部常规脱毛、消毒、 铺巾，沿腹正中线作一长约1．5cm的切口，找到盲肠后将粪便由升结肠挤入到 盲肠，在远离回盲瓣的盲肠根部用不吸收缝合线结扎。使用20号针头在盲肠上 贯穿2次，挤出肠内容物少许，形成盲肠漏，并于近端贯通处留置一条宽0．5cm 长3．Ocm橡皮条，防止针孔闭合，同时剪除适量腹膜避免包裹，然后将盲肠还 纳腹腔，逐层缝合腹壁切口，术毕立即皮下注射60ml／kg生理盐水以补偿术中 体液丢失并抗休克。术后动物置笼内自由活动，不禁饮食。 3．抑制补体激活对脓毒症大鼠一般状况的影响 观察各组大鼠活动、饮食、竖毛、呼吸、反应、腹腔变化、肺脏及胸腔 积液变化等一般情况。 4．抑制补体激活对脓毒症大鼠外周血细胞因子释放的影响 摘要 各组于术后2、4、8、12、16、24小时等六个时间点采集外周血标本，采 用放射免疫分析法检测大鼠血清TNF-Q、IL-6等细胞因子的水平变化，采用酶 联免疫吸附(ELISA)法检测细胞因子IL一10的水平变化，观察抑制补体激活对脓 毒症大鼠外周血细胞因子释放的影响。 5．抑制补体激活对脓毒症大鼠肺组织髓过氧化物酶的影响 通过采集肺组织标本检测肺组织的髓过氧化物酶(MPO)水平间接反映中性 粒细胞在肺组织内的聚集和浸润情况。 6．抑制补体激活对脓毒症大鼠肺组织病理学改变的影响 通过采集肺组织标本制作光镜和电镜切片观察肺组织的病理学变化情况， 结合肺组织髓过氧化物酶监测的肺组织内的中性粒细胞聚集情况探讨抑制补体 激活对脓毒症大鼠肺组织的作用及意义。 结果 1．三组大鼠的脓毒症反应有区别 B组大鼠脓毒症反应最强，C组明显减轻，A组没有相关表现或表现轻微。 2．抑制补体激活对脓毒症大鼠外周血细胞因子释放有影响 (1)TNF-Q 三组大鼠术后TNF—Q迅速升高，2h后迅速下降，之后分别再次升高，B 组除8h点外其余时间点均明显高于A组及C组(P0．05或PO．01)。 (2)IL-6 三组术后IL一6水平均迅速上升，于4h达到顶峰，然后迅速下降，B组明显 高于A组及C组(P0．05或P0．01)。 (3)IL-IO B组术后IL一10一直处于较低水平，而C组除2h和24h外，其余时间点均 明显高于B组(P0．05或P0．01)。 3．抑制补体激活对脓毒症大鼠肺组织髓过氧化物酶有影响 A组肺组织MPO水平术后一直处于较低水平，而B组和C组则迅速升高， 组(PO．05或PO．01)。 4．抑制补体激活对脓毒症大鼠肺组织病理学改变有影响 肺组织病理学改变提示B组损伤最严重，C组较之明显减轻。 摘要 结论 1．补体抑制剂CVF可明显降低补体激活介导的TNF—Q、IL一6等促炎细胞因子的 过度释放，同时可以相对增加抗炎细胞因子IL—10的释放，从而有效维持体内 细胞因子的平衡。 2．补体抑制剂CVF可以明显减轻中性粒细胞于肺内的聚集和浸润，并有效减轻 肺组织的损伤，显示出对肺组织良好的保护作用。 3．TNF—Q出现的“双峰现象”说明在脓毒症早期