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抑癌基因Apaf-I和APC在膀胱移行细胞癌中的表达及启动子甲基化状况的研究 中的表达及启动子甲基化状况的研究 研究生：王文卫 导师： 陈凌武教授 中山大学附属第一医院泌尿外科 中文摘要 膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，具有早期诊断困难，治疗后容易复发 的特点。尽管外科治疗和化疗方法不断进步，但治疗效果仍不十分满意，且其术 后的辅助治疗和长期随访也增加了患者的医疗费用和痛苦。因此，探索膀胱癌发 生、发展的分子生物学机制和遗传学本质，为膀胱癌的早期诊断及靶向性治疗提 供理论基础，是临床和科研上急需解决的重要课题。与其他恶性肿瘤一样，膀胱 癌的发生是多基因、多阶段变异累积形成的病理过程。这些基因辛要是癌基因、 抑癌基因及错配修复基因等。随着分子生物学的发展，原癌基因的激活和抑癌基 因的失活导致细胞增殖失控及凋亡缺陷被认为是肿瘤发生的主要机制。抑癌基因 功能的丢失可以通过多种途径，DNA甲基化是除缺失和突变之外导致抑癌基因失 活的第三种机制，异常甲基化可引起染色体结构、稳定性的改变和基因表达异常， 影响细胞的增殖和分化，最终导致抑癌基因表达沉默。因此，DNA甲基化被认为 是肿瘤发生的关键事件，在肿瘤相关基因的调控以及肿瘤的发生、发展过程中起 着重要的作用。 Apaf-I(细胞凋亡蛋白酶活化因子．1)、APC(腺瘤性结肠息肉病相关基因) 是两种重要的抑癌基因，分别在细胞凋亡和Wnt信号传导通路调控中发挥着重要 作用。新近研究证实Apaf-I、APC在许多正常组织中均有表达，但是在胃癌、肺 癌、乳腺癌等肿瘤中却出现表达缺失。有关Apaf-i、APC基因的表达和启动子甲 抑癌基因Apaf-I和APC在膀胱移行细胞癌巾的表达及启动子甲基化状况的研究 Green 基化状况在泌尿系肿瘤的研究报道较少，本实验拟通过SYBR I实时荧光定 态，用免疫组织化学的方法回顾性分析膀胱移行细胞癌中Apaf-1和APC的蛋白 表达，并分析两种抑癌基因的启动子甲基化状态和蛋白表达与膀胱癌临床生物学 行为的关系，探讨膀胱癌发生、发展的机制，为临床早期诊断和预后判断提供依 据，并为膀胱癌的分子治疗提供新的靶点。 第一部分抑癌基因Apaf-I及APC在膀胱移行细胞癌中 的表达及其临床意义 目的：探讨抑癌基因Apaf-!和APC在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。 方法：收集2001年1月至2003年12月在中山大学附属第一医院泌尿外科确 诊为膀胱移行细胞癌患者的临床资料和石蜡组织标本80例，采用免疫组织化学法 分析Apaf-1及APC在膀胱移行细胞癌组织标本中的蛋白表达状况及其表达与患 者的临床病理及生存期之间的关系。以15例正常膀胱组织的石蜡标本作对照。 免疫组化染色结果判定：Apat-I、APC的表达以染色强度和阳性细胞百分率 的得分之和进行判断：(1)染色强度：阴性为O分；弱阳性为1分；阳性为2分；强 阳性为3分。(2)每个标本观察3个有代表性的高倍视野，每个视野计数100个细 胞，确定阳性细胞数所占的百分比并取它们的平均值，根据阳性细胞比例，分为 于0～3分为不表达或低表达组，4“分为高表达组。 (29／80)和80．O％(12／15)，差异分别有统计学意义(X (14／15)，差异分别有统计学意义(x 率均与临床分级、分期明显相关，随肿瘤分级、分期的增加而降低，差异分别有 瘤单发与多发及有无淋巴结转移之间的比较，差异均分别无统计学意义(P0．05)。 抑癌基因Apaf-1和APC在膀胱移行细胞癌巾的表达及启动子甲基化状况的研究 47．8％(22／46)，差异有统计学意义(x 分别为52．9％(18／34)和43．5％(20／46)，差异无统计学意义(x2=0．702，P--0．402)。 ±1．58个月，中位生存时间46．5个月：高表达组为67．54±4．09个月，中位生存时 2=21．18，P=o．000)。 问67．3个月，经log．rank生存曲线检验，差异有统计学意义(x 生存时间为51．4±1．8个月，中位生存时