新生大鼠缺氧缺性脑损伤对松果体功能的影响及外源性褪黑素的神经保护作用研究.pdf

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对松果体功能的影响及外源性褪黑素的神经保护作用研究 中文摘要 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对松果体功能的影响及外源 性褪黑素的神经保护作用研究 中文手两斐中文摘要 第一篇新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 改良模型的建立和鉴定 目的 本研究通过改良Rice的HIBD新生大鼠模型，建立稳定可靠的新生大鼠中、重 度缺氧缺血性脑损伤动物模型，应用多种方法鉴定建模是否成功，降低传统制模方法 中实验大鼠的死亡率，为HIBD的进一步研究提供可靠的实验动物模型。 方法 72小时取材，观察模型鼠行为改变、大脑解剖标本并使用HE染色、免疫组化、细胞 凋亡鉴定建模成功与否。 结果 1．G组鼠建模时普遍出现全身性抽搐、右侧肢体抽搐、角弓反张及身体自发性左 旋；而C组鼠只有少部分出现右下肢瘫痪及抽搐。 2．G组SD大鼠左侧大脑半球呈现出现水肿、苍白、液化坏死的发生率约为63％， 明显萎缩率达91％：C组建模后72小时仍无空洞及液化形成。C组与G组比较，左 脑皮质及海马区水肿程度较轻，神经元数目减少不明显。 酶活性丧失达到高峰，72小时NSE酶活性渐恢复。G组HIBD后48小时凋亡最明 显，72小时凋亡细胞及神经细胞数目仍减少，与C组比较有显著性差异(p0．01)。 4．G组在缺氧结束后未见动物死亡。C组麻醉过程中死亡4只，缺氧过程中死亡 8只。存活率有显著性差异(PO．01)。 结论 多种方法学鉴定了改良后的Rice建模方法在实验动物死亡率低、成功率高的基 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对松果体功能的影响及外源性褪黑素的神经保护作用研究 中文摘要 础上可以成功建立中、重度缺氧缺血性脑损伤动物模型。 关键词 新生大鼠、HIBD、海马、行为学、大脑解剖标本、HE染色、免疫组化、细胞凋 亡 第二篇 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 对松果体功能的影响 目的 本实验通过观察松果体中褪黑素(MLT)合成酶芳香烷基胺-N．乙酰基转移酶 Nitric 诱生型一氧化氮合酶(induceOxide Synthase，iNOS)的表达与细胞凋亡的关系， 了解松果体功能与HIBD的关系；放射性免疫法测定外周血MLT水平。 方法 只，模型完成后第6、12、24、48、72小时5个时间点取松果体标本和心脏采血，每 个时间点6只。电镜观察松果体形态学改变，测定各组不同时间点松果体中AANAT mRNA、HIOMTmRNA的表达。观察松果体细胞的iNOS表达及细胞凋亡，放免法 测外周血MLT的浓度。 结果 AANATmRNA的表达水平均低于对应假手术组；纵向比较各假手术组之间 48小时有所回升，72小时恢复。 间HIOMTmRNA的表达水平均无明显变化。 比明显升高。 4．细胞凋亡：脑损伤后松果体凋亡细胞早期明显增多，尤以6小时、48小时为主。 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对松果体功能的影响及外源性褪黑素的神经保护作用研究 中文摘要 5．电镜观察：脑损伤后松果体的形态学亦以6小时、48小时改变为明显，出现线 粒体明显肿胀、粗面内质网极度扩张、细胞变性。 浓度水平降低；纵向比较假手术各组MLT浓度水平无明显变化，HIBD后24小时下 降，48小时MLT水平与24小时基本相等，72小时恢复正常。 结论 体中褪黑素合成的最后一个酶HIOMT的基因表达水平变化不明显。 小时恢复。降低了MLT的内源性保护作用可能参与早期HIBD的发病机制。 能下降的“引擎”。 4．脑损伤后6小时、48小时松果体细胞的iNOS表达增加，以后逐渐下降，72 胞凋亡有促进作用。iNOS表达和TUNEL法细胞凋亡参与了新生鼠缺氧缺血性脑损 伤后松果体细胞形态学改变。 关键词 缺氧缺血性脑损伤、芳香烷基胺-N．乙酰基转移酶、羟基吲哚．O．甲基转移酶、信 使核糖核酸、褪黑素松果体、iNOS、细胞凋亡 第三篇 外源性