第一章细胞培养技术的基本理论知识精要.ppt

2.细胞株 从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。 再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株 3.二倍体细胞 细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞。如仅数目相同，而核型不同的即染色体形态有改变者为假二倍体。 为保持二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种。 4.遗传缺陷细胞从有先天遗传缺陷者取材（主要为成纤维细胞）培养的细胞，或用人工方法诱发突变的细胞，都属遗传缺陷细胞。这类细胞可能具有二倍体核型，也可呈异倍体。 5.肿瘤细胞系或株这是现有细胞系中最多的一类，我国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类上皮型细胞，常已传几十代或百代以上，并具有不死性和异体接种致瘤性。 细胞系或细胞株的命名 HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）CHO：中国地鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary） 宫-743：宫颈癌上皮细胞，1974年3月建立NIH3T3：美国国立卫生研究院（National Institute of Health）建立，小鼠胚胎成纤维细胞，每3天传代，每次接种3×105细胞／毫升。 细胞系或株的鉴定、管理和使用 ATCC（）入库细胞要求检测项目如下： 培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等冻 存 液：培养基和防冻液名称细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长特性培 养 液：培养基种类和名称（一般要求不含抗生素）、血清来源和含量 细胞形态：类型，如为上皮或成纤维细胞等，融解后细胞生长特性核 型：二倍体或多倍体，标记染色体的有无无污染检测：包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等物种检测：检测同工酶，以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测免疫检测：一两种血清学检测细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名 课后思考题： 1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型? 2.体外培养的细胞整个生命活动过程包括哪三个时期，每个时期的特点是什么？ 3.简述体外培养细胞对生存环境的基本要求。 4．D-Hank’s与Hank’s的主要区别是什么? 5.血清的使用与储存有哪些注意事项？ * * * * * 第三节　培养细胞的生存环境与条件 １．细胞的营养需要： 　１）基本营养物质： 　　　氨基酸（１２种＋谷氨酰胺） 　　　维生素 　　　葡萄糖、核糖、脱氧核糖等　　　 　　　无机离子等 　２）促细胞生长因子：多由血清提供 　 ２．细胞的生存环境 １）温度条件对细胞生长的影响 不同生物来源的组织细胞培养温度不同；体外培养动物细胞最常用的温度是37℃。 耐低温不耐高温！ 培养细胞对低温的耐受力较对高温强；当温度在43℃以上1小时，细胞全部死亡;相反，温度不低于0℃时，对细胞代谢虽有影响，但并无伤害作用。在生理温度范围内，温度与细胞生长率之间存在正相关关系。 ２）气相环境对细胞生长的影响 动物细胞培养的气相环境都是采用5%CO2与95%空气（提供氧）的混合气体。 　Ｏ2参与细胞的能量代谢过程。 　ＣＯ2用于维持培养液的酸碱度。 　 　一般多为开放式培养 3）渗透压 正常渗透压维持细胞张力并调节细胞代谢，一般细胞渗透压为260～320mmol/L。 4）培养液的酸碱度对细胞生长的影响 大多数的有机体细胞能在pH6.0～8.0的环境中生存。最适宜的pH值范围是7.2～7.4。 体外培养的正常细胞耐酸能力要强于耐碱能力 5）无污染、无毒（前提条件！） 3．细胞常用的培养液和试剂 培养用液是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。 　平衡盐溶液 主要包括　 培养基 　 　　　　　 其他培养用液 　 天然培养基 合成培养基 1）平衡盐溶液(Balanced Salt So1ution：BSS) BSS 又称生理盐水或盐溶液，主要由无机盐和葡萄糖组成。本身具有维持渗透压，调控酸、碱度平衡的作用，同时能供给细胞生存所需的能量和无机离子成分；用作洗涤组织、细胞以及配制各种培养用液的基础溶液。 BSS 内含少量的酚红，作为溶液酸碱度变化的指示剂；溶液变酸时呈黄色，变碱时呈紫红色，中性时呈桃红色，借此易于观察到培养液pH 的变化。 几种常用的平衡盐溶液： Ringer、PBS、Tyrode、Earle、Hank’s、D-Hank’s、Dulbecco（都有相应配方） 最简单的BSS是Ringer。D-Hank’s与Hank