第七章平面色谱精要.ppt

结束 例5．生物学应用 Fe Cu Co Ni Ni Ni Ni Ti Mo 黑毛 红毛 黄毛 白 毛 兔毛的色谱图 毛发是这样,皮肤是否是这样 ? ? 取不同颜色兔毛(300 ~ 500 mg), 干法灰化, 溶于稀HCl 中,用 丙酮 : 丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展开后,显色 用纸色谱法分离A、B两种物质，在某条件下两物 质的比移值Rf分别为0.36、0.40。设A、B两物质 斑点的直径分别为0.2 cm,0.4 cm,当展开剂的前 沿达到10 cm时，A、B能否完全分离? 设A、B两物质色谱斑点的中心距原点分别为x1,x 2 cm,则 x1/10 = 0.36 x2/10 = 0.40 x2-x1 = (0.40-0.36)?10 = 0.4(cm) 欲分离两物质，两斑点中心距离至少为 (0.20+0.40)/2 = 0.30cm, 而实际两斑点中心距离为0.4 cm , 故在此条件下A B两物质可得到完全分离。 用纸色谱法分离A、B两种物质，在一定条件下A、B两物质的比移值分别为0.35,0.45，设A、B两物质色谱斑点的直径分别为0.50cm和0.80cm,要求展开剂前沿至少达到多少厘米时，A和B才能完全分离? 设x1, x2分别为A﹑B两物质斑点距原点的距离： 则 x1/y=0.35 x2/y =0.45 x2-x1=0.40+0.25=0.65 又 x2-x1=(0.45-0.35)y =0.65 ∴y =6.5(cm) 纸色谱法分离混合离子,若混合离子极性大小顺序为ABC,用弱极性有机溶剂展开后其Rf值大小顺序为______________________。 C, B, A 二、薄层色谱法 原理和特点 [原理]: 当展开剂从薄板上固定相的空隙中通过时, 由于各组分的K的不同和足够多次的分配. [特点]:装置简、操作方便; 展开时间短;样品负荷量大、斑点扩散少;同一张色谱图可用不同的试剂显斑，也可用浓硫酸等强氧化剂或在400 ~ 500ｏＣ 加热碳化检出. [缺点］：Rf值的重复性差 [克服办法］：标样和试样在同一块板上展开 吸附剂（固定相） 决定吸附性能的因素：吸附剂的化学组成、活性、表面积 ［要求］：合适的吸附力;与展开剂、被吸附物质均不起化学反应;粒度细小而且均匀（范氏方程，减少涡流扩散项） (1). 氧化铝 　　　氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝上吸附的很牢（所以，酸性物质分离不好），故通常用于分离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。 一般要求薄板用的活性为Ⅱ ~ Ⅲ级 　氧化铝的活性与含水量密切相关（含一定量的水份时，吸附剂表面的吸附中心回被水分子占据） ０　　３　　６　 １０　１５　 含水量（％） Ⅰ　　 Ⅱ　　Ⅲ　　Ⅳ　　Ⅴ 活性 市售的供薄层色谱用的Al2O3有: Al2O3 －H：氧化铝中无粘合剂 Al2O3 －G：氧化铝中含煅石膏（一般5％煅石膏） ［煅石膏CaSO4，作为粘合剂］　 Al2O3 －HF254：氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示剂 （在254 nm下呈黄绿色荧光） Al2O3 －GF254：氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂 （在254 nm下呈黄绿色荧光） 上述商品可以直接调料涂敷（1份料，2份水调合） （２）．硅胶（吸附性较Al2O3弱） 　　　硅胶是微酸性吸附剂，且适用于酸性、中性物质的分离（如有机酸、氨基酸、萜类、甾体）碱性物质则能与硅胶作用（当用中性溶剂展层，碱性物质有时停留在原点不动，或者得到拖尾的斑点，而不能很好的分离） 　　薄层用商品硅胶有：硅胶H（不含粘结剂）、硅胶G（含粘结剂煅石膏）、硅胶HF254（含荧光物质的硅胶）硅胶GF254（含有煅石膏和荧光剂） 此外，硅藻土、硅酸盐、杂多酸盐、聚酰胺、纤维素也可用作吸附剂。 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 活性 0 5 15 25 35 含水量（％） (3). 选择吸附剂的规律： 极性物质被极性表面的吸附剂吸附； 亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质 疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质 ３．展开剂（流动相） 展开剂的洗脱作