5微生物大小的测定和显微镜直接计数制药资料.ppt

实验五、微生物大小的测定和显微 镜直接计数 一、实验目的 1、学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测　定微生物大小的方法。 2、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 二、实验材料 酵母菌悬液 载玻片 盖玻片 目镜测微尺 镜台测微尺 血球计数板 计数器 显微镜 步骤1：校正目镜测微尺 (1) 把目测尺放入目镜中； (2) 镜台测尺放在载物台上； (3) 在40×镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以可得:目尺每格长度(μm)=（台尺格数×10）/目尺格数 实验二、微生物数量的测定 平板计数法； 目测，比浊法（分光光度计）； 显微直接计数法 。 注意事项： ①?从盖玻片与计数室缝隙间滴进样品液； ②?加样后静置3-5min，酵母菌均匀到一个水平上； ※ 浊度：a、每格5—10个菌体为宜； 　　　b、两个计数室计得的值来计算样品的含菌量。 计算： 通常数五个中方格的总菌数（A），然后求得每个中方格的平均值，再乘上25（25个中方格），就得出大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数，乘上稀释倍数（B），即原液中的总菌数。 总菌数（个/ml）=A/5×25×10000×B。 实验报告 1、结果记录在P92的表格： 思考题 根据你的实验体会，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？ 显微测微尺上的刻度大小和放大倍数会影响到测量结果吗? 2、思考题： 　环境因素对微生物的影响 　 　准备：一包培养皿/人，100ml普通细菌培养基/人 * * * * 实验一：酵母菌细胞的大小的测定 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺 目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。 　制作一片酵母菌的盖片，取下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在40×镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。（与计数结合进行） 步骤2：酵母大小的测定 酵母菌显微直接计数 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板。 不要从高处往下滴！ 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 在40×镜下计数：计数5个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上25就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。每个记数室体积 为0.1立方毫米。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半 计数步骤： 第二室 第一室 5 4 3 2 1 菌数/ml 二室平均值 B A 各中格中菌数 下次实验 * *