第九章植物脱毒技术精要.ppt

第九章 植物脱毒技术宜职院08.9 一、茎尖培养脱毒（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效果差。 （二）茎尖脱毒方法1、取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种 。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。 3．培养 25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。4．生根诱导 诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生根培养基继续培养1-2个月可生根。 （三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术的关键） 植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.3-0.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养 二、热处理脱毒 脱毒原理 即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。  2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更长时间。特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间适用：多数植物 三、其他组织培养脱毒方法（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因：一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖；二是愈伤组织发生了抗病毒突变。 （二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。（三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.14-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗的技术。脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接——嫁接苗培养——移植。 第二节 脱毒苗鉴定一、直接检查法 直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。即指示植物法。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。 三、抗血清鉴定法特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可以完成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。（一）原理  刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能发生高度专一性的血清学反应（免疫反应）（二）方法1、叶绿体凝集法 2、块茎沉淀法3、环形接口法4、酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测定法。现在灵敏度较高和常使用的方法。 四、分子生物学鉴定1、双链RNA法 通过提取纯纯化待测植物RNA，并对其进行电泳分析，可确定dsRNA存在，从而判断待检植物是否带病毒。2、互补DNA（c DNA）检测法 也叫DNA分子杂交法 * * 目的与要求 了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒苗的保存和繁殖方法。 具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。 全世界已发现植物病毒有近788种。 病毒的危害： 组织和细胞病变 新陈代谢等生理机能受到干扰 外观表现不正常状态 由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。世界作物生产中，病毒危害程度仅次于真菌。 危害一