从土壤中分离纯培养微.doc

从土壤中分离纯培养微生物并作初步观察鉴定实验报告系姓名： 学号： 【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化， 落形态观察及一系列的生理生化试验的结果，对照种属特征初步鉴定分离纯化的微生物所属的类群。【abstract】The separation and purification of microbial basic operation techniques on soil microorganism in the separation and purification, community morphology observation and a series of physiological and biochemical test results, the control species characteristics and preliminary identification of separation and purification of microorganisms belonging to the group 【关键词】细菌 放线菌 霉菌 划线分离 培养基的配制 高压蒸汽灭菌【Key Words】 Bacteria Actinomyces Streptomyces lineation separation culture medium pressure steam sterilization 前言：在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。群落是不同种类微物的混和体。为了生产和科研的需要，人们往往需要从自然界混杂的微生物群体中分离出 具有特殊功能的纯种微生物；或重新分离被其他微生物污染或因自发突变而丧失原 有优良性状的菌株；或通过诱变及遗传改造后选出优良性状的突变株及重组株。这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离纯化技术。纯培养是指一株菌种或 一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。 分离纯化技术主要由采集样品、富集培养、纯种分离和性能测定等几个基本环节组成。实验目的： 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 2、学习、掌握微生物的鉴定方法。3、 对提取的土样进行微生物分离、 纯化培养， 根据菌落的形态特征判断未知菌的类别。实验原理：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。通过如下几种方法可以分离纯化微生物：稀释倒平板法(pour plate method)、涂布平板法(spread plate method)、稀释摇管法(dilution shake culture method)、平板划线分离法 （stesak plate method） 。 此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化， 其基本原理主要包括两个方面： （一） 选择适合于待分离微生物的生长条件或加入某种 抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大部 分不需要的微生物。（二） 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。 微生物的观察可以用显微镜观察其细胞形态， 也可以用肉眼观察其菌落形态。 前者是微生物的显微镜观察技术，后者是微生物的肉眼观察技术。实验器材、试剂与实验方法：1.1器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、纸、记号笔、线绳、培养皿、自动立式压力蒸汽灭菌器、烘箱、移液枪、枪头、药匙、试管架、接种环、酒精灯、超净工作台。 1.2试剂：试剂牛肉膏、 蛋白胨、 琼脂、 可溶性淀粉、 葡萄糖、 孟加拉红、 1mol/L NaOH、 1mol/LHCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、80%乳酸、10% 酚液、95%乙醇、75%酒精。1.3土样： 土样取自漳州师范学院生物科学与技术系植物园，地下10cm-15cm左右。1.4 实验方法 1.4.1配制培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基00ml(用个10ml三角瓶和2支试管分装） 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。 配方如下：牛肉膏g 蛋白胨g NaCl 0.5g 琼脂 ~2.0g 水 00ml pH 7.4-7.6 1、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏和蛋白胨可分别放在中称量，倒入大烧杯用热水溶解。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2、加热溶解在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用 玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分