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菠菜叶绿素的分离 ?三、实验仪器及试剂 　　仪器：载玻片；展开槽；玻璃棒；研钵　　试剂：硅胶G；95％乙醇；石油醚（60～90）；丙酮；菠菜叶 ?四、实验内容及步骤　　 1．样品制备　　菠菜叶绿素的提取1～2片新鲜的菠菜叶剪碎放于研钵中研磨，然后加入20mL石油醚-乙醇（1：1）混合液继续研磨3分钟[1]。用移液管或滴定管将萃取液移至分液漏斗中[2]，加等体积水洗涤[3]（旋摇几下，但不可振荡以防产生乳化），分层，弃取下层水层，再加等体积水洗涤，弃取水层，将上层溶液移至干燥的小锥形瓶中，用无水硫酸镁干燥，备用。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　下一步?　　2．制板　　在小烧杯中放入2g硅胶，加入50mL0.5％羧甲基纤维素钠水溶液，调成糊状，均匀倒在3块干净的载玻片上[4]（2.5cm×7.5cm）,用玻璃棒刮平，轻轻振摇，使硅胶均匀铺在载玻片上且表面光滑均匀。于室温下放置15分钟，晾干。然后放入烘箱在105～110℃活化0.5小时。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　下一步?　　3．分离与鉴定　　在活化的薄层板一端约1～1.5cm处，用铅笔轻轻划一条直线作为起点线（不要划破吸附剂层）或在薄层板边缘作一记号。用管口平整的毛细管吸取菠菜叶绿素提取液点样，斑点直径约为2～3mm。溶剂挥发后，将点样一端放入已放有高约0.5cm展开剂的展开槽中[5]（展开剂为丙酮：石油醚=1：2），盖好盖，观察展开过程，当展开剂沿上行到距薄层板另一端约1cm时，立即取出，并立刻用铅笔划出展开剂前沿的位置。晾干后，仔细量下每个斑点所走的距离，计算Rf值。　　附注?　　[1]只需适当研磨，不可研得太烂而成糊状，否则会造成分离困难。?　　[2]也可用小布氏漏斗过滤，稍稍减压并用瓶子挤压固体。?　　[3]水洗的目的是洗涤乙醇及提取液中的少量水溶物。?　　[4]载玻片必须洗净，并用少量丙酮或乙醚擦拭。?　　[5]展开槽加入溶剂后，可轻轻摇动几下，使之充满溶剂蒸汽。 实验7. 薄层层析? 实验目的要求: 了解薄层层析的原理，操作和应用。 实验内容： 色素的薄层层析： 1、硅胶薄层板的制备 取洁净干燥的玻片数块，放在水平桌面上备用，称取硅胶H10克及40ml水，置于乳钵中研匀，用牛角勺涂布在玻片上，用手指抬起玻片一端，连续在桌面上轻轻拍打，使形成一均匀薄层，平放在水平玻板上，让水分自然蒸发，晾干备用。 2、配展开剂： 用吸量管准确量取氯仿2.00ml，甲醇0.50ml于洁净干燥的层析筒中，摇匀、密闭备用。 3、点样： 硅胶-H薄层板一块，用管口平整的毛细管将甲基橙、荧光黄及两者混合乙醇液分别点在起始线的三个原点上，斑点扩散直径不应超过2—3mm，放置片刻待乙醇挥干。 4、展开： 将点好样品的硅胶层析板放入盛有展开剂的层析筒中，（注意：切勿将点样处浸没于展开剂中进行密闭展开。）（如图） 当展开剂前沿扩散到距顶端1厘米左右时，取出薄层板，立即用大头针划出溶剂前沿，然后置薄层板于通风处挥干展开剂。 5、计算Rf值： 用直尺分别量出原点到斑点中心的距离和原点到展开剂前沿的距离，分别计算出：甲基橙、荧光黄，混合样品的Rf值，用混合样品的两个Rf值与对照品甲基橙、荧光黄比较鉴定混合样品。 展开： 在层析缸（可用250毫升烧杯）中加展开剂（95％乙醇：水=1：1）约5毫升（高度不能超过1厘米），如图3－22所示。盖上玻盖（薄层色谱需要在密闭容器中进行），静置一段时间，使杯内溶剂蒸汽达到饱和，然后将点好样品的薄层板斜放在层析缸内，起始线必须在展开剂液面之上。当展开剂上升到溶剂前沿线时各组分已明显分开时，取出薄板放平晾干。 求比移值(Rf值)： 在固定的条件下，不同的化合物在薄层上移动的距离不同，当吸附剂、溶剂、展开剂及温度等层析条件相同时，Rf值是一个特有的常数，可作定性分析的依据。将纯样品和未知液样品的Rf值进行对照，鉴定未知液。 思考题： 1．在一定操作条件下，为什么可利用Rf值来鉴定化合物? 2．在混合物薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位置? 3．展开剂的高度若超过了起始线，对薄层色谱有何影响? 4．荧光黄和亚甲基兰哪个爬行的速度快?为什么 附注： [1] 在制取薄层板中最常用的固态吸附剂是硅胶(SiO2·H2O)常含有粘合剂（CaSO4·H2O），以保证硅胶能粘在玻璃表面上，含有粘合剂的称为硅胶H，含有荧光物质的称为硅胶GF254（可在波长250nm紫外光下观察荧光），含粘合剂和荧光剂的称为硅胶GF254也可用氧化铝制板。 [2] 硅胶是缩水硅酸（SiO