薄层色的谱制作方法规程.pdf

薄层色谱制作方法规程 1.方法原理 2.薄层板 2.1 手工自制板 2.1.1 玻璃板的要求 2.1.2 制作方法 2.2 商品化供应的预制板和高效板 2.2.1 板的尺寸 2.2.2 预制板和高效板的预洗及活化 3.样品点样 3.1 点状点样和条带点样 3.2 样品点样位置 4.层析 4.1 展开室 4.1.1 直立式双槽展开箱 4.1.2 水平展开室 4.1.3 自动展开室(AMD) 4.2 溶剂 4.3 展开室状况 4.3.1 方法A (展开室不饱和) 4.3.2 方法B (部份饱和, 无滤纸) 4.3.3 方法C (展开室饱和, 有滤纸) 4.3.4 方法D (展开室饱和, 薄层预稳定) 4.4 参数 5.4.1 温度 5.4.2 空气湿度 5.层析后衍生作用 5.1 喷雾 5.2 浸渍 6.检测 6.1 定性分析 ( 同一性试验) 6.2 定量分析 6.3 关键的色谱数据 7.标准条件 7.1 HPTLC - 板 7.2 TLC - 板 １ 1.方法原理 薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔 吸附剂薄层的固定相上,利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色 谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同的力的作用。 (1) 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 (2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用， 氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运动 都在进行。基于这点，TLC 系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。 用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。色谱可用肉眼或使用光密度计和照相 机记录或影像系统方法来评价。 2. 薄层板 2.1 手工自制板 2.1.1 玻璃板的要求:用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄 1~2mm 的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮 存于干燥洁净处备用。玻璃板反复使用时，应注意经常用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的 光洁是保证薄层板质量的最基本要求 2.1.2 制作方法:除另有规定外，将1 份吸附剂加适量的水（如1 份硅胶G 一般加3 份水）， 在研钵中用研杵沿一个方向小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆,立即倾入涂布器中,均 匀地向前推进涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的规定操作涂布;涂布好的薄层板于室温下 在水平台上晾干,再在规定的温度(一般为 105℃~110 ℃)下烘约 30 分钟活化,贮于干燥器中备 用。薄层板的厚度一般为0.25~0.5mm. 。 2.2 商品化供应的预制板和高效板 2.2.1 板的尺寸 20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm 图1 不同的板尺寸 TLC/HPTLC 预制板有不同的规格供应。常用的尺寸为20 x 20，10 x 20，20 x 10，或10 x 10 cm。使用的规格取决于TLC 或HPTLC 的类别和样品的数目。 2.2.3 TLC/HPTLC 板的预洗及活化 一般来说，色谱板应用溶剂如氯仿-甲醇(8:2)，甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预洗。具 ２ 体操作可通过空白色谱展开来实现。 色谱板预洗完后,应在 105°C 加热 1 小时进行干燥，再在室温下置放至少2 小时（需采取