毕赤酵的母表达体系中重组蛋白的分离纯化.pdf

生物技术通报 年第 期 ·综述与专论· BIOTECHNOLOG Y BULLETIN 2009 3 毕赤酵母表达体系中重组蛋白的分离纯化 高炳淼 长孙东亭 罗素兰 安婷婷 （热带生物资源教育部重点实验室 海南大学海洋学院材料与化工学院 海南大学生物技术实验中心，海口 570228） 摘 要： 随着基因重组技术的快速发展，基因工程产品的利用越来越广泛，但其分离纯化的成本约占总成本的 60%~70%。因此，探索一些简单有效的分离纯化方法尤为必要。简单介绍了目前较为流行的毕赤酵母表达体系，着重概述 了重组蛋白分离纯化技术方法的应用情况。 关键词： 毕赤酵母 重组蛋白质 分离 纯化 Study on Separation and Purification of Recombinant Proteins in Pichia pastoris Expression System Gao Bingmiao Zhangsun Dongting Luo Sulan An Tingting （Key Laboratory for Tropical Biological Resources ，Ministry of Education Ocean College College of Materials Chemical Engineering Center for Experimental Biotechnology ，Hainan University ，Haikou 570228） Abstract ： Along with fast development of the gene recombinant technology ，the application of genetic engineering product is getting widespread ，but the cost of the separation and purification approximately have been being high. So it is essential to explore simple and effective separation and purification method to decrease the cost. This review focused on progress of Pichia pastoris yeast expression system ，the technique of separation and purification of the recombinant proteins recently. Key words ：Pichia pastoris R ecombinant protein Separation Purification [1] 从生物体中有效分离纯化基因重组蛋白质一 型酵母（Methy-lotrophicyeast ）表达系统 。 作为第 2 直是个难题。 对于基因重组蛋白纯化技术来说，选 代酵母表达系统，它不仅克服了大肠杆菌表达系统 择合适的表达系统是相当重要的，因为表达系统决 不能表达结构复杂的蛋白质、表达的蛋白不能分泌 定了细胞培养过程中产物的性质以及可能产生的 到细胞外、背景蛋白多、表达水平低等缺点，并且弥 杂蛋白。 毕赤酵母是近年来流行的原核和真核蛋白 补了哺乳类细胞、 昆虫细胞表达系统操作复杂、表 质的表达载体。 毕赤酵母能使外源真核基因正确翻 达水平低、产业化生产造价昂贵的不足，此外，还具 [2] 译和翻译后加工，并分泌多种蛋白质，使产物易于 有其他酵母表达系统无法比拟的优越之处 。 提纯。 纯化重组蛋白质的主要目的是分离出目的蛋 巴斯德毕赤酵母表达系统具有强有力的醇氧 白，主要的方法有浓缩沉淀、离子交换、亲和层析、 化酶基因启动子， 可严格调控外源蛋白的表达；同 反相层析等。 时作为真核表达系统，可对表达的蛋白进行翻译后 [3] 1 酵母表达体系 的加工与修饰，从而使表达出的蛋白具有生物活性 。 巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris ）是在酿酒酵母 另外，毕赤酵母菌营养要求低、生长快、培养基廉 表达体系的基础上， 用其他的酵母菌株构建的、可 价，易于进行操作和培养；其高密度发酵技术业已 高效稳定表达外源基因的新表达系统，即甲醇营养 成熟，便于工业化生产；表达量高，许多蛋白可达到 收稿日期： 2008-09-01 基金项目：国家自然科学基金（座机电话号码 ），国家“863”计划（2007AA02Z114 ），新世