常用液的相色谱柱原理及使用与维护保养.pdf

+ 常用液相色谱柱使用与保养SOP + 主要内容 1、液相色谱柱基本理论知识 2、常用液相色谱柱使用方法与维护保养 3、液相色谱柱常见问题分析与解决方案 + 1.2 液相色谱柱的结构及其主要功能 液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤 片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。 柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70 kg/cm2 时， 也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用 于柱填料的装填。 压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有 小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。 密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制 成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。 + 1.3 液相色谱柱的分类与应用范围 分类方法很多，可按键合相类型、用途（分析 型与制备型）、基质种类等进行分类。 1.3.1硅胶基质柱（4大类） 目前，分析型液相色谱柱多为硅胶基质柱，细分为： 高纯硅胶柱：以高纯度硅烷化硅胶（Silica ）为填料，应用范 围较广，但只能在PH2.0-7.5，小于60度的条件下使用。又由 于强极性硅羟基（Si-OH)的次级保留效应较强，所以应用受 到局限，已被键合相柱所取代。 反相硅胶柱：是以硅烷化硅胶为基质，表面键合弱极性官能 团的固定相。目前多用C18 （ODS ）、C8 （MOS）、C4 （B）、 C6H5 （phenyl，苯基）等。用于分离大多数有机化合物，应 用范围最广。 正相硅胶柱：是以硅烷化硅胶为基质，表面键合极性官能 团的固定相。目前较多的为：NH2— （氨基）、CN— （氰基）、 DIOL （二羟基，也常做HILIC单独分类列出，多用于分离有机酸、 蛋白质等）。多用于分离光学异构体和反相柱子不能分离的极 性比较大的物质 。 离子交换柱：是以硅烷化硅胶为基质，以磺化交联键合强阳/ 阴 离子基团（磺酸盐/季铵碱）的固定相，又分为强酸性、强碱性、 弱酸性、弱碱性等不同规格。用于分离解离性较强的有机盐类 化合物。（注意：不要同离子色谱混淆，离子色谱主要是分离 无机盐类化合物或某些带点离子。） 1.3.2聚合物基质柱 聚合物基质柱是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯、聚甲基丙 烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝胶作为主要填料的一类色 谱柱。其相对于硅胶柱具有更强的疏水性及更宽泛的pH范围 （1.0～14.0），但柱效较低，目前主要应用于凝胶渗透色谱 （GPC）、凝胶过滤色谱（GFC）及分子排阻色谱（MEC）。 主要用于分离蛋白质类等大分子化合物。 1.3.3其他无机物填料柱 这类色谱柱仅限于特殊用途，主要有石墨化碳、氧化铝 （Al O ）、氧化锆（ZrO ）等填料。不需要进行表面改性，其 2 3 2 自身表面即可对各类化合物有强保留。可在任意pH （氧化铝除 外，不能大于12.0）及高温度（可达100℃）下使用。其中， 石墨化碳填料柱能分离多种化合物，主要用于分离几何 异构体；氧化铝柱刚性强，柱床稳定，可分离多种化合物且多 用于制备色谱；氧化锆柱较氧化铝柱有更强的pH适用范围及 能耐受更高的温度，但其应用尚待进一步研究。 1.3.4建立色谱柱档案 应同色谱仪器档案一样重视色谱柱档案，主要内容包括： 品牌、型号、系列号、购进日期、购进发票、使用记录（使用 日期、使用人、使用目的、使用情况）、维护保养记录（老化 时间、老化人、故障现象、故障原因、处理方法、处理结果及 附图）等，并以档案盒形式保存，最好做到专柱专用。 1.3.5常用液相色谱柱主要应用范围与特点汇总 1.3.5.1反相色谱柱 柱填料类型 主要应用范围 特点 C18 （ODS ） 可分离多种化合物，最适合用 普适性好；保留性强，用途 于极性样品或做离子抑制的样 广 ；可用于正相。