大肠杆的菌表达重组taq dna聚合酶的分离和纯化.pdf

第26卷第5期 中南林学院学报 V01．26No．5 OFCENTRALSOUTHFORESTRYUNIVERSITY Oct．2006 2006年10月 JOURNAL [文章编号]1000--2502(2006)05--0050--05 大肠杆菌表达重组TaqDNA聚合酶的分离和纯化 何钢1，王义强1，李樊2，刘贤桂3 (1．中南林业科技大学生物环境科学与技术研究所，湖南长沙410004，2．中南林业科技大学生命科学与技术学院，湖南长沙410004l 3．中南林业科技大学资源与环境学院，湖南长沙410004) [摘 要] 以插入TaqDNA聚合酶基因的pET一24a表达质粒转化五．coli菌株，表达TaqDNA聚合酶，用反复冻融的方法裂解菌体． 表达产物为可溶性蛋白，采用Duo·Flow系统(Bio—Rad)及S柱，Tris缓冲液pH为7．5，以o～1mol／L盐梯度洗脱方式，收集洗脱峰，透 L 析去盐可得到高纯度的产品．经PCR反应与商品Taq酶的一个活性单位相比较，重组的Taq酶活性有1个单位．用该方法可以从1 培养液中分离得到5．51mg产品． [关键词]生物技术TaqDNA聚合酶I大肠杆菌I表达1分离}纯化 [中图分类号]Q784 [文献标识码]A andPurificationof DNA inE．coli Separation Taq Polymerase HE Fan2，LIU Gan91，WANGYi—qian91，LI Xian—gui3 (1．Instituteof andEnvironmental of 410004，Hunan，ChinaI Biological Science＆TechnologyCSUFT，Changsha of 2．SchoolLife of 410004，Hunan，China； Sciences＆technologyCSUFT，Changsha 3．SchoolofResourcesEnvironmentof 410004，Hunan．China) CSUFT，Changsha Abstractl To the insertedwith was expressTaqDNApolymerase，theexpressionplasmidpET-24a TaqDNApolymerasegene transformedintothehostcellstrain was modified and of BLn(DE)3．Soluble by products proteinlysed freeze-thrawing high are wereobtained Dou—Flow Scolumn．TheconditionsasfollowsI trisbuffer7．5and purification through system(Bio—Rad)and