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第三章 高效液相色谱分析法 踏雪复习资料 第三章 高效液相色谱分析法 HPLC （HighPerformanceLiquid Chromatography）  §2-1 高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法： 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相、高效分 离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。 5 高压：150-350*10 Pa 高效：大于30000 塔板/米 -9 -11 高灵敏：10 g （紫外检测）、10 g （荧光检测） 一、HPLC 与GC 差别 1．分析对象的区别 GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、 热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤 其对大多数生化样品不可检测 。（占有机物的20%） HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品 （包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、 热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测 。（用途广泛，占有机物的80%） 2．流动相的区别 GC：流动相为惰性气体，组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相 pH 种类较多，选择余地广，改变流动相极性和 值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 也可以增大分离选择性。 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压 （液体粘度大，峰展宽小） 4.液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。 5.仪器设备不同 为了解决复杂样品的分离， GC 一般使用程序升温技术， HPLC 则采用梯度洗脱。 高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。该法已成为现代分析技 术的重要手段之一，目前在化学、化工、医药、生化、环保、农业等科学领域获得广泛的应用。但在实际应用中，能用其相 色谱法分析的试样一般不用液相色谱法，因为气相色谱更快，更灵敏，更方便，耗费低。 现代高效液相色谱法的特点：三高、一快、一广 高柱效——n=104 片/米，柱效高 （远高于一般LC） 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛 （可分析80%有机化合物） 二、高效液相色谱仪流程图 色谱过程是一特殊的动态多次重复分离过程：从进样阀引入的样品组分被流动相带入色谱柱。由于不同组分与流动相和 固定相的分子间作用力不同，它们在色谱柱的移动速度不同，先后流出色谱柱进入检测器。由检测器记录分离过程--色谱图。  成功的背后总伴随着泪水! - 1- 第三章 高效液相色谱分析法 踏雪复习资料 高效液相色谱仪的主要部件 (1)高压输液系统 5 150 350 10 Pa 储液罐、高压输液泵、过滤器和压力脉动阻力器 等组成主要部件之一，压力： ～ × 。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相 （10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速 是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 (2) 分离系统 分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。色谱柱一般用内部抛光的不锈 钢制成。其内径为2 ~ 6mm，柱长为 10~50cm，柱形多为直形，内部充满微粒固定 相。柱温一般为室温或接近室温。色谱柱柱体为直型不锈钢管，发展趋势是减小填 料粒度和柱径以提高柱效。 (3) 检测器 检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是：灵敏度高，响应快、 噪音低、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。为减小柱外的 谱带展宽，检测