高效液的相色谱原理和操作详解.pdf

高 效 液 相 色 谱 我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表： 数量 方法 项目 1985 年版 1990 年版 1995 年版 2000 年版 鉴别 9 34 150 HPLC 法 检查 12 40 160 含量测定 7 60 117 387 鉴于 HPLC 应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握 并应用 HPLC 。 I ．概论2 一、液相色谱理论发展简况2 二、HPLC 的特点和优点 2 三、色谱法分类3 四、色谱分离原理3 II ．基本概念和理论5 一、基本概念和术语5 二、塔板理论8 三、速率理论 （又称随机模型理论）9 III ．HPLC系统 10 一、输液泵11 二、进样器13 三、色谱柱14 四、检测器16 五、数据处理和计算机控制系统20 六、恒温装置20 IV ．固定相和流动相 20 一、基质（担体）20 二、化学键合固定相22 三、流动相23 1．流动相的性质要求23 2 ．流动相的选择24 3 ．流动相的pH值24 4 ．流动相的脱气25 5 ．流动相的滤过25 6 ．流动相的贮存26 7 ．卤代有机溶剂应特别注意的问题26 8．HPLC用水 26 V ．HPLC应用 26 一、样品测定27 二、方法研究27 附件：高效液相色谱法（HPLC ）复核细则28 一、对起草单位的要求：28 二、对复核单位的要求：28 I ．概论 一、液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时， 由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和） 的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称 为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett ）在 1906 年研究用碳酸钙分 离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展 出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送 流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效 液相色谱法(High performance Liquid Chromatography ，HPLC)是在经典液相色谱 法的基础上，于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典 液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力， 需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相