现代色的谱分析讲稿1.pdf

现代色谱分析 • 色谱法原理 • 色谱法原理 • 气相色谱法 • 气相色谱法 •高效液相色谱法 •高效液相色谱法 第一章色谱法原理 第一章色谱法原理 Principles of Chromatography Principles of Chromatography §1-1 概述 色谱法早在1903年由俄国植物学家Tsweet分离植物 色素时采用。后来不仅用于分离有色物质，还用于分 离无色物质，并出现了种类繁多的各种色谱法。许多 气体、液体和固体样品都能找到合适的色谱法进行分 离和分析。目前色谱法已广泛应用于许多领域，成为 十分重要的分离分析手段。 色谱法的种类很多，但不管属于哪一类色谱法，其共同的基本特 点是具备两个相：不动的一相，称为固定相；另一相是携带样品流 过固定相的流动体，称为流动相。当流动相中样品混合物经过固定 相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差 异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力 的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同 的次序从固定相中流出。 色谱法分类 色谱法分类 1．按两相状态分类 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC ），根据固定相是固体 吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液 体），又可分为气固色谱（GSC ）和气液色谱（GLC ）．液体为流 动相的色谱称液相色谱（LC ）。同理，液相色谱亦可分为液固色谱 （LSC ）和液液色谱（LLC ）．超临界流体为流动相的色谱称为超 临界流体色谱（SFC ）。 2．按分离机理分类 2．按分离机理分类 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分 离的方法，称为吸附色谱法(adsorption chromatography) 。利用组分 在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱 法(partition chromatography 。利用组分在离子交换剂（固定相）上 的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为离子交换色谱法(ion exchange chromatography ) 。利用大小不同的分子在多孔固定相中 的选择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法 (steric exclusion chromatography ) 。以上四种为基本类型色谱法。 此外还有： 亲和色谱法(affinity chromatography)：专属亲和力 手性色谱法(chiral chromatograohy)：手性固定相 毛细管电泳法(capillary electrophoresis)：电泳淌度 3．按固定相的外形分类 3．按固定相的外形分类 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱，它又可分 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱，它又可分 为填充柱色谱和毛细管色谱；固定相呈平板状的色谱 为填充柱色谱和毛细管色谱；固定相呈平板状的色谱 法，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。 法，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。 §1-2 色谱法实验结果评价 色谱法实验结果评价 1. 系统适用性试验 主要是对色谱仪与实验条件构成的色谱系统的检验，包括： • 理论塔板数 • 分离度：无特殊规定时，定量峰与相邻峰的Rs≥1.5 • 重复性：峰面积的RSD≤2.0％(n=5) • 拖尾因子：T ：0.95～1.05 2. 建立色谱分析方法需要考察的内容： •精密度(precision)： 日内精密度：重复性repeatability (intra-day) — 在相同实验条件下，由 一个分析人员测定所得结果的精密度。 日间精密度： time-different intermediate precision (inter-day) 中间精密度：同一实验室，不同分析人员、不同设备测定结果的精密 度。考察随机变动因素对精密度的影响。 重现性(reproducibility ) （再现性，室间精密度）：在不同实验室，由不 同分析人员测定结果的精密度。 • 准确度(accuracy) 回收率试验：常用此方法