液相色的谱实验操作.pdf

Waters 中国有限公司 培训中心 液相色谱教程 (三) 液相色谱实验操作 启动液相色谱仪器的流程 开启HPLC系统各个设备的电源 – 打开泵、自动进样器、检测器电源，待设 备通过自检后，打开计算机，启动色谱管 理软件 准备流动相 – 过滤,脱气 色谱泵排气 – 用新配制的流动相灌注泵 ©2004 Waters Corporation 启动液相色谱仪器的流程 用准备好的流动相平衡色谱系统 – 可在泵的控制面板上设定流速参数(15×5泵需在软件 控制下操作) – 系统大约需平衡0.5--1小时方能稳定工作 准备样品 – 用流动相溶样或重组样品 编制仪器方法,开始实验 ©2004 Waters Corporation 液相色谱对流动相的要求 色谱柱对流动相的要求 – 过滤除去微粒 – 纯度的要求 超纯水，或用KMnO4处理过的双蒸水 有机溶剂：色谱纯(溶剂中的杂质含量尽可能低)， 并与填料相匹配 – 缓冲液的pH值，在填料的允许范围(一般在pH2-8)内 – 缓冲液（盐）的浓度不要太高(≤100mM) – 流动相对样品的溶解度 调整有机溶剂和水的比例 最好用流动相溶样 ©2004 Waters Corporation 液相色谱对流动相的要求 液相色谱仪器对流动相的要求 – 与检测器匹配 – 脱气 – 避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统） – 溶剂的粘度 – 防止细菌的生长 ©2004 Waters Corporation 流动相的脱气 流动相脱气的目的 – 使色谱泵的输液准确 输液量均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 – 提高检测的性能 防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低 – 保护色谱柱 减少死体积 防止填料的氧化 ©2004 Waters Corporation 流动相脱气的方法 加热 – 简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易 造成流动相组成的变化 抽真空 – 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果 超声波振荡 – 简单，但效果不够理想；超声时间不要太长(1分钟 左右即可) 通惰性气体（一般用氦气） – 可保持在线连续脱气，多用于低压梯度 在线脱气机 （in-line degasser) – 可保持连续脱气，多用于低压梯度 ©2004 Waters Corporation