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液相色谱 色谱现象 In 1903，俄国植物学家Michael Tsweett’s Work(see Ber. Deut. Botan. Ges., 1906; 24: 384). Chromatography = (chromatus = color, graphein = to write). 主要内容 色谱原理与分类 色谱理论 凝胶过滤色谱 离子交换色谱 疏水色谱（疏水相互作用） 聚焦色谱（等电点） 反相色谱（疏水相互作用） 色谱原理 色谱分离的主体介质由 互不相溶的流动相（mobile phase）和固定相（stationary phase）组成。色谱就是根据混合物中的溶质在两相之间分配行为的差异引起的随流动相移动速度的不同进行分离的方法。 色谱的一般过程 色谱原理 组件： A 色谱柱(column) B 固定相(stationary phase) C 流动相(flow phase) D 洗脱液(elution) E 检测器(detector) F 部分收集器(portion collector ) 色谱分类 1)、按应用的目的 A、制备性色谱(preparation Chromatography)：工业规模，实验室规模 B、分析性色谱(analytical Chromatography)：GC、LC、HPLC、TLC等。 ? 2)、按流动相 A、GC: 气-固色谱法(固定相为固体) 气-液色谱法(将不挥发的液体固定在适当的固体载体上作为固定相) B 、LC 液-固色谱(固定相为固体) 液-液色谱(液体固定相固定在适当的固体上) ? 3)、按色谱的展开形式 A、柱色谱法 B、毛细管色谱法 C、平板色谱法：硅胶板色谱、纸色谱 色谱分类 4)、按压力 根据操作压力（主要是柱两端的压降），分为低压（0.5MPa）、中压（0.5~4.0MPa ）和高压（4.0~40MPa）。 5)、按流动相流动方向 轴向和径向 6)、按展开程序 A)、洗脱法 B)、顶替法 C)、迎头法 6)、按展开程序 A)、洗脱法：又称淋洗法，如将含不同组分的样品注入色谱柱，流动相连续流过色谱柱，并携带样品组分在柱内向前移动，经色谱分离后，样品中不同组分依据与固定相和流动相相互作用的差别，而顺序流出色谱柱。 B)、置换法：又称顶替法，当混合物样品注入色谱柱后，各组分皆与固定相有强作用力，若使用一般流动相无法将他们洗脱下来，为此可使用一种比样品组分与固定相间作用力更强的置换剂（或称顶替剂）作流动相，当它注入色谱柱后，可迫使滞留在柱上的各个组分，依其与固定相作用力的差别而依次洗脱下来，且各谱带皆为各个组分的纯品。置换法现已在大规模制备色谱中获广泛应用，在生物大分子纯品制备中取得良好的效果。 C)、前沿法：又称迎头法，将含三个等量组分的样品溶于流动相，组成混合物溶液，并连续注入色谱柱，由于溶质的不同组分与固定相的作用力不同，则与固定相作用最弱的第一个组分首先流出，其次是第二个组分与第一个组分混合流出，最后是与固定相作用最强的第三个组分与第二个和第一个组分混合流出。此法仅第一个组分纯度较高，其他流出物皆为混合物，不能实现各个组分的完全分离，现已较少采用。 7)、按原理分类 国际通用色谱法分类及其缩写 二极管阵列检测器 这种检测器，一般是一个光电二极管对应接受光谱上一个纳米（nm）谱带宽度的单色光。 例如，Waters生产的996型光电二极管阵列检测器，波长范围为190～800nm对应512个光电二极管，平均1.2nm谱带宽度由一个光电二极管接收。 工作原理 当复光透过流通池后，被组分选择性吸收，透过光具有了组分的光谱特征。此透过光（复光）被光栅分光后，形成组分的吸收光谱，照射到光电二极管阵列装置上，使每个纳米光波的光强变成相应的电信号强度，因信号弱需经多次累加，而后给出组分的吸收光谱。这种记录方式不需扫描，因此最短能在几个毫秒的瞬间内获得流通池中色谱组分的吸收光谱。 用二极管阵列装置可以同时获得样品的色谱图（C-t曲线）及每个色谱组分的吸收光谱（A-λ曲线）。色谱图用于定量，光谱图用于定性。也可以用计算机将这种图谱绘在一张三维坐标图上（X-t、Y-A、Z-λ），而获得三维光谱-色谱图。可以在一张三维谱上，同时得到定性、定量信息。 色谱流出曲线与术语 （2）用体积表示的保留值 3. 相对保留值r21 4. 区域宽度 5. 色谱流出曲线的数学描述 色谱理论 组分保留时间为何不同？色谱峰为何变宽？ 组分保留时间：色谱过程的热力学因素控制； （组分和固定液的结构和性质） 色谱峰变宽：色谱过程的动力学因素控制； （两