薄层色谱、柱色谱及凝胶色谱法 .ppt

薄层色谱、柱色谱及凝胶色谱法  金 敬 杰 色谱法概述 1 发展历史 俄国生物学家茨维特(T s w e t t)首先提出来的。 1903年， T s w e t t柏林会议上宣读了他的研究成果。 1906年，正式发表。 样品：植物色素的石油醚提取液。 柱： CaCO3(固定相） 洗脱剂： 纯石油醚（流动相）。 结果： 有色谱带出现。 实验方法：如图 （1-1） 所示： 1919 T s w e t t逝世，当时他的方法并未引起注意。 1931 R . k u h n（库恩）用该法成功分离了胡萝卜素和叶黄素。 1938 R . k u h n Obtain Noble P rise. 1943 R . k u h n 发明了离子交换色谱。 1944 英国的M a r t i n . J . P和S y n g e .R . L发明了纸色谱。 1948 T i s e l I u s（瑞士）发明了电泳和 吸收分析 。 1952 英国的M a r t I n . J . P和S y n g e .R . L又发明了液相色谱。 1956 V a n . D e c e m t e r 提出了填充柱速率理论: H=A + B/u + Cu S t a h l 发明并完善了薄层色谱。 F l o d i n发明了凝胶色谱。 1958 G o l a y 发明了毛细管色谱； 氢火焰离子检测器。 1969 K i r k l a n d 提出了表面孔度担体的新型填料。 H e r m u n 研制成第一条高效液相色谱仪。 1975 H . S m a l l 离子交换柱 1979 D . T. G j e r d e and J .S .F r i t z非抑柱的单柱离子色谱. 总之：1956 Van. D e e m t e r ：柱速率理论。F l o d i n ：凝胶色谱理论。Stahl：薄层色谱。再加上1943年发明的离子交换色谱，使色谱学这门科学开始成为一门独立的学科。 结论： 色谱法的分离效能是红外光谱、核磁和质谱所不及的,而且一般来说色谱法的灵敏度要比红外光谱高。 色谱法有一个非常大的弱点，就是在缺乏标准样品的,情况下定性比较困难。而质谱法可以测定未知物的分子量,核磁可以测定分子结构，红外光谱法可以测定分子中的官能团，这是色谱法所不及的。 以上看出，色谱定性困难（缺乏标样下），而 质谱 （MS ) 测未知物分子量 核磁 （NMR) 测分子结构 红外光谱（IR) 测分子中的官能团 色谱、质谱、光谱、联用，取长补短，发展迅速、发挥更大 的作用。 1 薄 层 色 谱 薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。 1.1层析原理： 利用吸附剂（硅胶、氧化铝等）对不同组分吸附能力的差异从而达 到分离目的的方法。 1.2 薄层层析的作用 （1）分离（0.5g以下） （5）确定组分数 （2）柱层析的先导 （6）定性鉴定 （3）其他分离手段的效果检测 （7）粗略比较含量 （4）监控反应 1.3 薄层层析的器材选择 1.3.1 基板：玻璃、塑料、金属箔 1.3.2吸附剂： （1）种类： 常用：氧化铝（强极性）、硅胶（中强极性） 不常用：硅藻土、纤维素、糖类、活性碳 （2）符号：H——无任何添加剂