薄层色谱和柱层析.ppt

* A A B C D E 32 16 16 8 16 8 4 4 12 12 2 2 8 12 8 层析柱分离物质的示意图： * 固定相为固体颗粒，装在层析柱内，高5cm，固定相周围充满液体流动相，每厘米柱中液相体积为1cm3。若在柱顶加入1cm3溶剂,其中含32mg样品，同时应有相同体积的溶剂从柱底流出，此时样品处于柱中A位置。若样品的分配系数是1，则它在固相与液相间等量分配。若再有1cm3的溶剂加到柱上，A部分中的溶剂带着16mg的物质向下移动到B，A和B中的物质都将发生再分配， * 不同组分的含量 不同组分在柱中的位置 上部 中部 下部 不同物质分配系数不同时： * 三、装柱 1.湿法装柱 （1）用镊子取少许脱脂棉放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧；再在脱脂棉上盖上一层厚0.5cm的石英砂，关闭活塞 * （2）用3：1石油醚/乙醚混合溶剂将中性氧化铝调成糊状后，徐徐倒入柱中； （3）用橡皮塞轻轻敲打色谱柱下部，去除柱子中气泡,使填装紧密 * （4）当装柱至3/4时，再在上面加一层厚0.5cm的石英砂 ； 操作时一直保持上述流速注意不能使液面低于砂子的上层 （如图）； * 2.加样品 1)湿法加样:用尽量少的溶剂溶解待分离样品, 沿柱壁加入,当此溶液流至接近石英砂面时，立即用展开剂洗涤玻璃壁，直至洗净为止。 2)干法加样:用溶剂将待分离的样品溶解,然后加入60目的簇硅胶,将溶剂彻底脱干,这样产品就被硅胶吸附,然后将硅胶加入层析柱 * 3.洗脱 1.洗脱剂的选择:配合选用的硅胶的用量以及样品的用量来选择其极性组合,一般而言Rf值为0.15-0.25 * 当最先下行的色带快流出时，更换另一接收瓶，继续洗脱，至滴出液近无色为止，再换一接受瓶。 * 四、注意事项 1.装柱要紧密，要求无断层、无缝隙。 2.在装柱、洗脱过程中，始终保持有溶 剂覆盖吸附剂。 3.一个色带与另一色带的洗脱液的接受不要交叉 。 * THANKS * * * * * * * * * * * 薄层色谱(TLC) 1 概 述 色谱法是目前最常用的一类分离技术，它利用不同结构或不同性质的物质在不相混溶的两相中分布不同而进行分离。当将其中一相固定（称固定相），而使另一相流过（称流动相）时，则这些物质被流动相带动，以不同的速度向前移动，经过一段时间后，不同的物质移动的距离有较明显的差异，从而达到分离。该方法目前已有多种操作，由于分离效能好，操作简便，已在各个领域中得到广泛的应用。 关于色谱法的发展可追溯到十九世纪末、二十世纪初的俄国，最先由植物学家研究色素时发现。但直到二十世纪三、四十年代才开始实际应用。1941年，A.J.P.Martin和R.L.M.Synge为解决氨基酸的分析问题， * 将溶剂抽提中的一个相固定在硅胶上，装在柱内，并按色谱法操作，使另一液相流过柱子，分离获得成功。从此出现了基于分配原理的分配色谱法，因此获得了诺贝尔奖。以后的发展采用了纤维素、继而采用滤纸作分配色谱载体，发展了纸色谱法。薄层色谱法的研究和发展也出现在二十世纪的三、四十年代，现在已和气、液色谱一起成为最常用的色谱分离、分析方法。为与柱色谱相区别，并突出纸色谱和薄层色谱的特点，这两种方法也叫平床色谱法（Flat bed chromatography）或平面色谱法（Planar chromatography）。 色谱法经过多年的发展已有多种操作形式，其分类方法也有多种。按固定相和流动相的物态可分为以气体为流动相的气相色谱（包括气固色谱、气液色谱）和以液体为流动相的液相色谱（包括液固色谱、液-液色谱）；如以固定相的操作方式以及形状分类则有柱色谱、 纸色谱、薄层色谱； * 2-薄层色谱中，组分的移动情况常用比移值Rf来表示： Rf = 原点至组分点中心的距离/原点至流动相前沿的距离 也有用“高比移值”表示： hRf = Rf × 100 和“相对比移值”表示，即相对于某一物质X的Rf值，用Rx表示： Rx= Rf/Rx （原点至组分点中心距离与原点至物质X点中心的距离的比值） Rf总小于1； Rx可小于1，也可大于1；hRf可在1～100之间 * 薄层色谱中，Rf值与组分的分配系数K值有关： K=Cs/CM =溶质在固定相中浓度