第七章 高效液相色谱分析.ppt

第二章 高效液相色谱分析 (High Performance Liquid Chromatograph, HPLC) §2.1 概述 一、 高压液相色谱法的流程 (P81) 二、HPLC的特点 三：HPLC与GC的比较 1 GC要求样品瞬间气化，不分解，适合低中沸点、分子量小于400而又稳定的有机化合物，而HPLC一般在室温下进行，样品能配成溶液即可进行测定。因此，对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大的有机物，原则上都可以用液相色谱法进行分离分析。 2 GC只有一种可供选择的色谱相---固定相，HPLC有两种可供选择的相，特别是流动相，可任意配成比例，改变载液的浓度和极性可改变组分分配比。 3 GC无法回收组分，而HPLC较为容易。 §2.2 HPLC的基本理论 HPLC的基本概念和理论，如保留值、分配系数、分配比、分离度、塔板理论及速率理论，均与GC相同，主要区别在于流动相不同。（对比见p65表3-1） 速率方程： 三、 传质阻力项： 1. 固定相传质阻力相 2 流动相传质阻力相 1） 流动的流动相传质阻力相 2） 滞留的流动相中传质阻力相 由于柱内色谱峰扩散引起的塔板高度的变化可归纳为： §2.3 HPLC的主要类型及其分离原理 正相液液色谱：以极性有机液体作固定液，而以非极性的或弱极性的有机液体为流动相的液液色谱叫做正相液液色谱，这种色谱适宜于分析极性化合物。 反相分配色谱：以非极性有机液体为固定相，以极性有机液体为流动相的液液色谱叫做反相分配色谱，它适宜于非极性物质的分析。 关于正相和反相色谱： 正相色谱与反相色谱的区分：是基于固定相和流动相的相对极性关系将色谱过程分为正相和反相色谱； 正相色谱的流动相的极性比固定相的极性弱；反相色谱的流动相的极性比固定相的极性强； 正相色谱分离的组分随其极性增强保留值增大，随流动相极性增强保留值减小；反相色谱分离的组分随其极性减弱保留值增大； 正相色谱和反相色谱能分离的样品的类型：均可分离不同类型的化合物的混合物、同系物、异构体。 正相色谱更适于油性与水溶性的、极性与强极性的化合物的分离；反相色谱更适于非极性的或极性较弱的化合物混合物的分离； 　化学键合相是将各种不同有机基团通过化学反应共价键合到硅胶表面的游离羟基上，代替机械涂渍。该技术可以解决固定液从载体上流失的问题。是HPLC中应用最广泛的一个分支。 二、液固色谱 用固体吸附剂作固定相，被 分离物质在固定相和载液之间进 行分离的一种液相色谱。它又称 为吸附色谱，因为所用的固定相 为吸附剂。 其作用机制是根据吸附剂对溶质分子（X--试样）和溶剂分子（S--流动相）吸附性能不同来进行分离的。m和s分别代表在流动相和吸附剂表面上。 ①?常用的吸附剂：常用的吸附剂有碳酸钙、硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、硅镁吸附剂、聚酰胺等。 ②?液固色谱的用途：适合分离分子量中等的油溶性试样，对具有不同官能团的化合物和异构体有较高选择性。 三、离子交换色谱 原理： 分离阳离子：-R- Y+ + X+ -R- X+ + Y+ 阳离子树脂 被分离样品离子 分离阴离子：-R+ Y- + X- -R+ X- + Y- 阴离子树脂 被分离样品离子 对于阳离子交换树脂，平衡常数为： 用途：常用于分离氨基酸、蛋白质、核酸、无机离子等，在药物化学、生物化学上得到广泛应用。 四、离子对色谱： 离子对色谱是将一种（或数种）与样品离子电荷（X+）相反的离子（Y-，称为对离子或反离子）加入到色谱系统的流动相（或固定相）中，使其与样品离子结合生成弱极性的离子对（呈中性缔合物），此离子对不易溶于水而迅速溶于有机相中，因此，存在这样一个萃取平衡： 用途： 正相离子对色谱：反离子加到固定相中，固定相为水溶液，流动相为有机溶剂，则构成正相离子对色谱。此技术是使用涂敷在多孔硅胶或纤维素上的含酸的水溶液（用于分离碱），或是含碱的水溶液（用于分离酸）作固定相，以有机溶剂作流动相的离子对色谱。 反相离子对色谱：反离子加到流动相中，固定相为有机溶剂，流动相为水溶液的离子对色谱称为反相离子对色谱。 适用范围：p71-72 五、离子色谱法 　　分离原理与离子交换色谱法类似 此方法中，离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相，电导检测器为通用检测器。 分离过程 p72-73 化学抑制型离子色谱法及非抑制型离子色谱法p73 适用范围p73 六、空间排阻色谱法