第十一章液相色谱.ppt

本章要点 液相色谱的分类 反相色谱和离子交换色谱的机理 流动相的选择 检测器的选择 GC与HPLC的比较 GC 分析挥发性物质 (20%的化合物) 不能用于热不稳定物质的分析 毛细管柱有很高的柱效 灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器FID和TCD 流动相为气体，无毒，易于处理 运行和操作容易 仪器制造难度较小?? GC与HPLC的比较 HPLC 几乎可以分析各种物质，包括热不稳定物质 色谱柱不能很长，柱效不会很高 缺少较高灵敏度的通用检测器（仅:蒸发光散射） 流动相可能有毒，费用较高 运行和操作较难 仪器制造难度大 11.4.5 离子色谱 流动相为电解质溶液。样品以电解质溶液为背景，但浓度大大小于流动相电解质的浓度。因此难以使用电导检测器测定由于样品离子而产生的微小电导的变化。 1975年Small为了克服流动相中的电解质离子对电导检测器的干扰，在分析柱和检测器之间增加一个“抑制柱”，消除流动相离子带来的本底电导。他把这一方法叫做“离子色谱”（Ion Chromatography）。 H+ + OH- H2O 在抑制柱离子色谱中，利用抑制柱可以除去流动相中的高浓度电解质，抑制背景电导，从而解决了离子色谱中使用电导检测器时本底电导太强的问题。 检测器，按测定原理分类： 光学检测器 根据被测物质对光的吸收、发射和散射等性质进行检测 应用范围广 紫外-可见检测器、示差折光率检测器、蒸发光散射检测器、荧光检测器、化学发光检测器、手性检测器 电学及电化学检测器 根据被测物电化学性质进行检测? 安培检测器、电导检测器、库仑检测器、极谱检测器、介电常数检测器（测电容量） 热学性质检测器 利用热学原理进行检测? 光声检测器、热透镜和光热偏转检测器 特点之二：高速度、高灵敏度和分离度 小颗粒所致的高柱效带来了显著的益处。通过缩短柱长或提高流速可获得高分离速度及高分离度。 增加柱效的另一个效应是增加灵敏度，这是由于在分离过程中减少了扩散，被分析物在检测点的浓度更高。 * * 第十一章 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography 11.1 基本概念和术语 　　以液体为流动相的色谱法称为液相色谱。高效能固体细微粒为固定相，高压溶剂为流动相，配备高灵敏度检测器的液相色谱系统为高效液相色谱系统。 术语： A、被分离组份，被分离物质，溶质 B、 流动相，溶剂，洗脱剂 C、固定相包括：载体（担体）、涂层 D、流出液、洗出液 11.2 　分类和特点 分类： 分配色谱：经典液液分配色谱 　 化学键合相色谱（分配+吸附） 极性键合相色谱 非极性键合相色谱 （反相化学键合相、离子对色谱） * 硅胶基底的反相色谱 * 聚合物基底的反相色谱 11.2 　分类和特点 分类： 吸附色谱 离子交换色谱 阳离子交换色谱 阴离子交换色谱 离子色谱 体积排阻色谱 凝胶过滤色谱(极性固定相和流动相) 凝胶渗透色谱(非极性固定相和有机溶剂流动相) 特点： 　与经典LC比，快速、高效、高灵敏度 　与GC比，慢速，但可分离难气化物质 A. 高压：150-300 Kg/cm2 B. 高速：1-10 mL/min C. 高效：?5000 塔板/m D. 采用高灵敏度检测器 11.3 反相色谱 11.3.1 保留和分离机理 　　以非极性键合或聚合物基底固定相为固定相，以极性溶剂为流动相，利用被分离组份在两相中的分配差异和在固定相上吸附的差异，使之彼此分离。 正向色谱和反相色谱的差异？ 11.3.2　固定相 以硅胶为基底的硅氧烷：C18、ODS、octadecylsilane 以聚合物为基底：PSDVB 11.3.3　流动相 乙腈、甲醇、乙醇、水（缓冲液）、及混合液 11.3.4 流出次序 极性大的先流出，基团小的先流出 11.4 离子交换色谱 11.4.1 保留和分离机理 　　以离子交换剂为固定相，借助于试样中电离组份对固定在交换剂基体上带相反电荷的离解部位亲合力的不同，使其彼此分离。 11.4.2　固定相 交联聚苯乙烯为基体的离子交换树脂 硅胶为基体的键合离子交换剂 强酸型、弱酸型、强碱型、弱碱型 ? 11.4.3　流动相 电解质溶液和缓冲液 ——参见经典离子交换色谱 一般用含盐的水溶液作为流动相，应满足以下几个条件：（1）能充分溶解各种盐并提供离子交换必需的缓冲液；（2）具合适的离子强度以控制样品的保留值；（3）对被分离的对象有选择性。 11.4.4　流出次序 与溶质有效电荷、原子序、二次平衡有关 M2+ + 4Cl- MCl42- Cu2+ + 4Cl-