第五章 高效液相色谱法(6h).ppt

第五章 高效液相色谱法 高效液相色谱（High Performance Liquide Chromatography）还可称为高压液相色谱（High Pressure Liquide Chromatography）、高速液相色谱（High Speed Liquide Chromatography）、高分离度液相色谱（High Resolution Liquide Chromatography）或现代液相色谱（Modern Liquide Chromatography）。 第一节 高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法具有以下特点。 （1）分离效能高 由于新型高效微粒固定相填料的使用，液相色谱填充柱的柱效可达2×103~5×104块/米理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱103块/米理论塔板数的柱效。 （2）选择性高 由于液相色谱柱具有高柱效，并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性。因此，高效液相色谱法不仅可以分析不同类型的有机化合物及同分异构体，还可分析在性质上极为相似的旋光异构体，并已在高疗效的合成药物和生化药物的生产控制分析中发挥了重要的作用。 第二节 高效液相色谱法的分类 高效液相色谱法可依据溶质(样品)在固定相和流动相分离过程的物理化学原理分类。 (1)吸附色谱(Adsorption Chromatography) 用固体吸附剂作固定相，以不同极性溶剂作流动相，依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离。 (5)亲和色谱(Affinity Chromatography) 以在不同基体上，键合多种不同特性的配位体作固定相，用具有不同pH值的缓冲溶液作流动相，依据生物分子(氨基酸、肽、蛋白质、核碱、核苷、核苷酸、核酸、酶等)与基体上键联的配位体之间存在的特异性亲和作用能力的差别，而实现对具有生物活性的生物分子的分离。 第三节 高效液相色谱法的应用范围和局限性 一、应用范围 高效液相色谱法适于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定易分解的、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性物质和多种天然产物；合成的和天然的高分子化合物等。它们涉及石油化工产品、食品、合成药物、生物化工产品及环境污染物等，约占全部有机化合物的80％。其余20％的有机化合物，包括永久性气体，易挥发低沸点及中等分子量的化合物，只能用气相色谱法进行分析。 二、方法的局限性 第—，在高效液相色谱法中，使用多种溶剂作为流动相，当进行分析时所需成本高于气相色谱法，且易引起环境污染。当进行梯度洗脱操作时，它比气相色谱法的程序升温操作复杂。 第二，高效液相色谱法中缺少如气相色谱法中使用的通用型检测器(如热导检测器和氢火焰离子化检测器)。近年来蒸发激光散射检测器的应用日益增多，有望发展成为高效液相色谱法的一种通用型检测器。 第三，高效液相色谱法不能替代气相色谱法，去完成要求柱效高达10万块理论塔板数以上，必需用毛细管气相色谱法分析组成复杂的具有多种沸程的石油产品。 第四，高效液相色谱法也不能代替中、低压柱色谱法，在200kPa至1MPa柱压下去分析受压易分解、变性的具有生物活性的生化样品。 综上所述可知，高效液相色谱法也和任何一种常用的分析方法一样，都不可能十全十美，作为使用者在掌握了高效液相色谱法的特点，应用范围和局限性的前提下，充分利用高效液相色谱法的特点，就可在解决实际任务中发挥重要的作用。 第四节 高效液相色谱仪简介 高效液相色谱仪可分为分析型和制备型，虽然它们的性能各异、应用范围不同，但其基本组件是相似的，对分析型商品仪器可有如下两种组合方式： ①完全紧凑的整体系统。其死体积小，灵敏度高，体现高效液相色谱仪总体实用的特点。 ②独立部件的组合系统。其灵活性高，可根据不同的分析目的，组装成不同的联接方式。 现在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，即能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高效率、功能齐全的分析工具。 一、高压输液泵 对高压输液泵的要求是： ①泵体材料能耐化学腐蚀。通常使用普通耐酸不锈钢（Cr1Ni8Ti9）或优质耐酸不锈钢(Cr18Nil2Mo2)。为防止酸、碱缓冲溶液的腐蚀，在离子色谱或亲和色谱分析中现已使用由聚醚醚酮(PEEK)材料制成的高压输液泵。 ②能在高压下连续工作。通常要求耐压40~50MPa·cm-2，能在8～24h连续工作。 ③输出流量范围宽。对填充柱：0.1～l0mL／min(分析型)；1~100mL／min(制备型