高效液相色谱1.ppt

讲课内容 高效液相色谱(HPLC) 简介 分离的基础 高效液相检测器类型、检测灵敏度与选择性 高效液相色谱柱 样品的制备 反相与正相HPLC 离子样品：反相，离子对和调子交换HPLC 高效液相色谱流动相及梯度洗脱 常规样品反相分离的系统方法 高效液相色谱软件操作及计算机辅助方法建立 制备HPLC的分离 生化样品：蛋白质，核酸，糖类及其有关化合物 手性分离 定量（包括痕量）分析 完善方法：论证和移植 高效液相色谱在制药行业、天然产物研究、生命科学、环保行业、食品安全、表面活性剂等应用实例介绍 高效液相色谱技术与应用 （一）高效液相色谱(HPLC) 简介 本节主要内容 高效液相色谱的用途 了解液相色谱的发展史 学习色谱法及原理 色谱的主要分离方式 认识高效液相色谱设备 高效液相色谱工作过程 高效液相色谱的类型及应用领域 高效液相色谱的用途 高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。 与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展, 有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。 HPLC 成为解决生化分析问题最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向 液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染分析得到新的发展。 高效液相色谱是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、食品、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。 高效液相色谱的用途 制药行业 环保行业 食品安全 表面活性剂 生命科学 天然产物 高效液相色谱技术的优缺点 高效液相色谱法的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。 高效液相色谱法的缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。 目前的发展趋势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜。 色谱法及高效液相色谱的发展史 1890s, Tswett---Russian botanist 1931, Kuhn et al. separation of lutein and xanthine; employ for preparative separations 1941, Martin and Synge: gas chromatography 1942, Tiselius and Claesson: developed the first form of refractive index detector 1951, Martin and Randall: described the first electrical conductivity detector; James and Martin: in-line microburette detector---the invention of GC 1956, symposium on GC held in London Detectors: Gas Density Balance, Catherometer, Flame thermocouple detector, flame ionization detector (FID) and β-Ray detector. Keulemans and Kwantes: rate theory 1968, Kirkland developed UV absorption detector 1987, Kirkland developed chromatographic column ---HPLC 色谱法：(chromatography)： 以试样组分在固定相和流动相间的溶解、吸附、分配、离子交换或其他亲和作用的差异为依据而建立起来的各种分离分析方法称色谱法。 几个概念 色谱柱：进行色谱分离用的细长管。 固定相：管内保持固定、起分离作用的填充物。 流动相：流经固定相的空隙或表面的冲洗剂。 色谱法原理示意图 色谱的主要分离方式 根据溶质的不同保留机理或色谱分离过程的物理化学原