高效液相色谱3.ppt

高效液相色谱技术与应用 （三）高效液相检测器类型、检测灵敏度与选择性 本节主要内容 高效液相检测器的类型 检测灵敏度与选择性 高效液相检测器的类型 检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号。 常用检测器有 紫外可见吸收检测器 （ultraviolet－visible detector，UVD） 荧光检测器（fluorescence detector， FD） 示差折光检测器（differential refractive Index detector， RID） 蒸发光散射检测器 (Evaporative Light Scattering Detector，ELSD ) 电化学检测器 （elec）chemical detector， ED） 化学发光检测器 （Chem-iluminescence detector， CD） 电导检测器（conductivity detector, CD） 质谱检测器 (Mass Spectrometer detector，MSD) 不常用检测器有 化学反应检测器(Reaction detectors) 放射活性检测器(Radioactivity) 红外检测器(IR) 小角度激光散射检测器(Low-angle light scattering, LALLS) 手性检测器 分子量检测器 热学性质检测器 光电导检测器 磁旋光检测器 旋光检测器 粘度仪等 紫外可见吸收检测器 （ultraviolet－visible detector，UVD） 紫外可见吸收检测器（UVD）是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。 紫外吸收检测器 光电二极管阵列检测器（photodiode array detector，??PDAD） 紫外可见吸收检测器 （ultraviolet－visible detector，UVD） 紫外吸收检测器： 紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽（190nm～800nm）。它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。　　局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。 紫外可见吸收检测器 原理： 基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比。 很多有机分子都具紫外或可见光吸收基团，有较强的紫外或可见光吸收能力，因此UV-VIS检测器既有较高的灵敏度，也有很广泛的应用范围。由于UV-VIS对环境温度、流速、流动相组成等的变化不是很敏感，所以还能用于梯度淋洗。一般的液相色谱仪都配置有UV-VIS检测器。 用UV-VIS检测时，为了得到高的灵敏度，常选择被测物质能产生最大吸收的波长作检测波长，但为了选择性或其它目的也可适当牺牲灵敏度而选择吸收稍弱的波长，另外，应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相。 光电二极管阵列检测器（photodiode array detector，??PDAD） 也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。 光电二极管阵列检测器原理 以光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件的UV-VIS检测器（图8-15）。它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。与普通UV-VIS检测器不同的是，普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进