南京科捷液相色谱知识讲座.ppt

目录 HPLC 基本理论 溶剂传输系统 (泵) 进样器 色谱柱 检测器 流动相 什么是色谱图? 样品与流动相、固定相之间的吸收、分配、离子交换、体积排阻等作用，将混合组分分离成各个独立的组分。 分离、定性、定量 ：分析色谱 分离、纯化 ：制备色谱 Injection（进样） Interaction（相互作用） Elution（洗脱） abacbc aabcbc a b c 色谱方法的发展历程 色谱分析 HPLC 系统的配置 溶剂传输系统 (泵) 泵 将溶剂（流动相）从溶剂瓶传送到进样器 泵 - 流速和压力的稳定性 - 操作方便, 可用于多种不同的溶剂  - 防止脉冲的系统 - 可用于等梯度模式和梯度模式 - 持久耐用 泵操作模式 等梯度模式 - 分析过程中，溶剂组分保持不变 梯度模式 - 分析过程中，按时间改变溶剂组分 - 单泵 : 低压梯度模式 - 并联泵 : 高压梯度模式 等梯度模式 梯度模式 按时间改变溶剂组分 单泵 : 氦脱气和真空脱气 2) 并联泵 操作泵的注意点 1. 必须对溶剂进行脱气 2. 勿空转 3. 使用缓冲溶液之后一定要用水清洗 4. 检查溶剂间的可混合性 5. 启动泵之前要灌泵 6. 控制脉冲 7. 检查泵压 进样阀 进样阀 流动相中加载样品，使流动相把样品带入色谱柱 进样阀 - Rheodyne 进样阀 (手动进样阀) - 自动进样器 使用进样阀的注意点 1. 使用进样针前要清洗干净，并去除气泡 2. 清洗进样针 : 选择样品易于溶解的溶剂 3. 附加清洗方法 :  使用过的溶剂 → 丙酮 →二氯甲烷 4. 使用自动进样器针管清洗溶液时要格外注意 5. 连接管线越短越好 (进样阀和色谱柱, 色谱柱和检测器) 6. 管线的错误连接会导致死体积的发生 Rheodyne 进样阀 1. 定量环进样阀 → 进样量由定量环体积决定 2. 需要定期清洗定量环 进样方式 1. 全充满 - 进样量是固定时 - 进样体积 : 定量环体积的三倍以上 - 正确性 : 0.1% 2. 部分充满 - 进样量是可改变时 - 进样体积 : 小于定量环体积的一半 - 正确性: 1% (取决于进样技术) 自动进样器 1. 自由进样 – 改善了实验室的生产力 2. 极好的重现性 3. 自动化 – 温度控制, 预处理 Young Lin HPLC 系统 - Spark-Holland 产品 ? Basic Marathon 自动进样器 ? Triathlon 自动进样器 ? Midas 自动进样器 自动进样器类型 Spark-Holland 自动进样器 色谱柱 什么是色谱柱 ? 色谱柱把混合物分离成各个单个成分 色谱柱的选择 - 填料 - 粒径 - 硅胶形状 - 孔径 填料性质 粒径大小 硅胶形状 孔径大小 孔径大小 : nm or ? 选择孔径大小的方法 填料特性 色谱柱 材料 - Steel 色谱柱 - PEEK 色谱柱 分离原理 - 正相色谱柱 - 反相色谱柱 - 离子交换色谱柱 - 体积排阻色谱柱 色谱柱材料 Steel 色谱柱 : 钢卡套柱 → 柱接头 PEEK色谱柱 Radial-Pak 色谱柱  分离方法 1. 正相 (吸附) 正相色谱柱 Silica phase（硅胶柱） - Resolve silica, u-Porasil, Nova-Pak silica - Hypersil silica, Nucleosil silica, Zorbax silica 键合固定相 - Nova-Pak CN, NH2 - u-Bondapak CN, NH2  - Resolve CN, NH2  - Hypersil CPS, APS - Lichrosorb CN,