色谱4-tlc.ppt

薄层色谱系统 薄层板 未改性固定相 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性。 薄层色谱参数 保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。， 流动相与展开体系 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素： 薄层扫描 原理 薄层定量方法可分为 直接法——测定照射光照射色谱后，因被测物斑点的存在引起的透射光和反射光的变化。并通过随行标准比较待测斑点的量。 间接法——将部分照射光的能量转换成较长波长的荧光，即荧光测量。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 定性、定量方法 定性方法 利用保留值 测定Rf值 测定相对Rf值，即Rx值。 利用二维色谱（改变色谱条件，比较Rf值是否一致） 应用 药物鉴别——采用标准对照法 杂质检查 杂质对照品法 高低浓度法 药物标准品对照法 不允许有杂质斑点存在，即以方法灵敏度来控制杂质量。 含量测定——主要用于中药有效成分的分析 同时一种成分的色谱行为会受到混合物中其他成分的影响，这种影响的大小取决于混合成分的种类、浓度、以及斑点间的距离等。这种影响一般使分配系数变小。如两个相邻斑点中后面的一个展开速度较其单独展开时为大。 固定相的活度及其调节 在其他因素一定时，活度增加，Rf值减少，反之亦然。可通过预吸附溶剂分子，调节其表面活性。例如可将活化薄层板放在相对湿度恒定的空间里来达到调节活度的目的。 实际工作中常常使固定相预吸附一定量单一或混合溶剂蒸气，预吸附量越大，溶剂前沿运动速度越快，物质斑点的Rf值越小。 预吸附还可能影响Rf在0.6-1.0之间的斑点的分离。 在层析过程中发生的边缘效应就是由于这种因素引起的。尤其是使用混合溶剂时，极性较弱和沸点较低的溶剂，在薄层边缘容易挥发，使边缘部分的展开剂中极性溶剂的比例增大，Rf相对增大。同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的Rf值小，即边缘效应，若在展开前先将展开槽与薄层板用展开剂蒸气饱和后再展开，边缘效应可消失。采用双槽层析缸尤为有利。 预吸附中 展开中 展开过程中用不同于展开剂的溶剂调节槽内气氛 一强度为I的光照射薄层时，被照射的一面为“近表面”，另一面为“远表面”。 近表面 远表面 光（I） 镜反射或表面反射Is(表面平滑) 漫反射 (表面粗糙) 入射强度I0 出射强度(IT ) IT / I0为薄层透射率AT 返回光强(IR ) IR / I0为介 质的漫反射率AR I0 -（ IR + IT ）=差为被介质吸收并转换为热的光强 光学系统 薄层色谱扫描仪光学系统有三种 单光束单波长——受光源稳定性和薄层质量影响严重。 单光束双波长——对背景不均匀引起的干扰有补偿作用，选择的两个波长应接近些。 双光束单波长——可补偿光源不稳引起的误差，但对板层不均匀无作用。 光 单色器 检测器 光 波长1 波长2 检测器 斩波器 光 单色器 分 光 镜 检测器 检测器 透射光法 测定组分对应的斑点对特定波长光的吸收度来确定含量。将薄层板从左至右移动，对斑点扫描，单色光透过薄层板后被记录下来，将测得的吸收度对Rf值绘制扫描曲线，得薄层色谱图 光源 单色器 反射光法 一定波长的光照射薄层，穿进薄层内的光部分被薄层吸收，部分经过漫反射又折回表面成为反射光。当对薄层进行扫描时，测量其反射吸收度，可得到反射光谱。反射吸收度与物质含量有确定关系，可进行定量。 光源 单色器 扫描方式 直线式扫描——照射在薄层板上的光束与薄层板作直线相对运动。光束固定，扫描板台运动。光束落在薄层上的截面为一长方形带。 锯齿式扫描——照射在薄层板上的光束与薄层板的相对运动轨迹呈锯齿形或矩形。 直线扫描 锯齿扫描 轮廓曲线 积分曲线 斑点 斑点 A B C A B C C A B 对于不规则斑点，两种扫描结果不一样。同一斑点从A、B、C三个不同方向扫描，锯齿扫描所得积分值变动小，而直线扫描所得积分值变动大。 测量方式 吸光度测量——测定的是漫反射光。适合于本身有颜色或有紫外吸收的物质。 I0 IR 检 测 器 荧光测量——灵敏度较吸光度测量高，板层不吸收发射光，测量噪音小，基线稳定。为消除激发光的影响，在板层和检测器之间必须加一块滤光片，以截去反射激发光，只让发射的荧光抵达检测器。 滤光片 荧光 检 测 器 荧光淬灭测量——吸附剂有荧光，样品斑点无荧光，在紫外光照射下，被测物在荧光背景上显示出暗灰斑点。本法适合于本身无颜色，又无特征紫外吸收或荧光的物质。该测