液相色谱基础1.ppt

时间安排 第一天 上午 09:00－10:30 液相色谱基础知识 10:45－11:45 液相色谱常见问题及对策 下午 13:30－17:00 输液泵的维护 第二天 上午 9:00－11:30 手动进样阀的维护 下午 13:30－17:00 紫外检测器的维护 问题解答 岛津液相色谱维护保养培训班 岛津北京分析中心 姚建国 液相色谱基础知识 液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析 流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用 气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法 适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析 流动相只起运载样品分子的能力 一、色谱起源 二、定义 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同 而进行分离的技术 移动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，色谱柱固定液 液相色谱流程图 采用 “HPLC” 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 无在线脱气应注意： 1）每天脱气 2）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长 岛津VP系列输液泵 LC-10ADVP / LC-10ATVP工作原理 进样器 自动进样器 手动进样器 原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入 交叉污染的原因 手动进样法 一般的方法 1.在进样状态下清洗针口 2.在装填状态下插入微量注射器 3.注入样品 4.切到进样状态 手动进样法 便捷的方法（不需清洗） 1.进样状态下插入微量注射器 2.切到装填状态 3.注入样品 4.切回到进样状态 柱温箱 分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性 柱压低于150kgf/cm2 柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃ 缓冲液PH使用范围为2～7 流动相有机溶剂比例过低, 柱效下降快 常用检测器 紫外检测器（包括二极管阵列检测器） 荧光检测器 示差折光检测器 电导检测器 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：比耳定律，A＝KCL 优点： 1）灵敏度高 2）对温度和流速不敏感 3）可用于梯度洗提 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 二极管阵列检测器（SPD－M10AVP） -二十一世纪标准紫外检测器 色谱定性依据： 保留时间 常规紫外检测器 峰纯度 二极管阵列检测器 1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰 原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。 优点：通用型检测器， 缺点： 1）对温度变化敏感 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3）属于中等灵敏度的检测器 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%) 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子 液相色谱基础知识 紫外检测器 二极管阵列检测器 液相色谱基础知识 样品池 二极管阵列 光栅 D2 / W 灯 每一组分可在每一波长处得到一吸光度值 二极管阵列检测器 二极管阵列检测器的优点 原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系） 荧光检测器 示差折光检测器 返回