H-2Db四聚体的制备和其在检测LCMV特异性CD8+T细胞中的应用.pdfVIP

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2016-03-23 发布于安徽
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H-2Db四聚体的制备和其在检测LCMV特异性CD8+T细胞中的应用.pdf

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H-2Db四聚体的制备和其在检测LCMV特异性CD8+T细胞中的应用.pdf

生物工程学报 Chin J Biotech 2008, February 25; 24(2): 278-284 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 b + H-2D LCMV CD8 T 1, 2‡ 3‡ 1 1 2 刘毅 , 徐丽慧 , 曾学思 , 孙建方 , 何贤辉 1 , 210042 2 , 510632 3 , 510632 : MHC 四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2Db 基因型(如C57BL/6) 小鼠的特异性CD8+ T 细胞免疫应答, 需要建立H-2Db 四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR 方法克隆H-2Db 重链基因的cDNA, 进而构建H-2Db 胞外域与生物素化酶BirA 底物肽(BSP)融合蛋白的表达载体, 并在大肠杆菌中获得表达。在LCMV GP33-41 b 抗原肽(KAVYNFATC, KAV)和人β -微球蛋白存在时, 通过稀释法复性获得H-2D /KAV 单体。该单体经生物素化并纯化 2 后与PE-链亲和素按4: 1 的比例混合, 即形成四聚体。通过流式细胞术检测经KAV 肽免疫的C57BL/6 小鼠体内的LCMV 特异性CD8+ T 细胞的频率, 结果表明在外周血、引流淋巴结和脾脏中均可检测到一定频率的LCMV 特异性CD8+ T 细胞, 其中以对外周血标本染色的效果最佳。成功建立了小鼠H-2Db 四聚体制备技术平台, 为监测及分析基于H-2Db 基因型小鼠的实验性免疫治疗创造了条件。 : H-2Db , MHC 四聚体, 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒, 原核表达 Preparation of H-2Db Tetramer and Its Application in Enumerating the CD8+ T Cells Specific for Lymphocytic Choriomeningitis Virus 1,2‡ 3‡ 1 1 2 Yi Liu , Lih