RNA干扰抑制结肠癌细胞血管内皮生长因子表达.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2007 , 27 ( 8) : 14 ～18 RNA 干扰抑制结肠癌细胞血管内皮生长因子表达 1 2 3 3 4 1 1 李铁军 　康 　楷 　宋建宁 　胡瓒斓 　TongChuan H e 　张秉强 　张才全 ( 1 重庆医科大学附属第一医院　重庆 　4000 16　2 重庆医科大学附属第二医院　重庆 　400010) ( 3 重庆市第九人民医院　重庆 　400700　4 Molecu lar Oncology L aboratory The Un iversity of Ch icago M edical Center IL60637 , U SA ) ( ) 摘要 　目的:应用 RNA 干扰技术抑制结肠癌血管内皮生长因子 V EGF 表达 。方法 :将 V EGF 基 因作为 RNA 干扰的靶区 ,通过 ERNA i网上提供的服务 ,设计两个特异的 RNA 干扰序列 ,将其装 入含 U 6启动子的载体上 ,构建成抗 V EGF 基因的小发夹样 RNA ( shRNA )表达载体 ,再转染人结 肠癌细胞 H T29 ,通过 R TPCR、Northern b lotting、免疫荧光和 W e stern b lotting,观察 V EGF表达受抑 的程度 。结果 :成功构建了两种抗 V EGF基因的 shRNA 表达载体 , R TPCR、Northern b lotting、免疫 荧光和 W e stern b lotting,均发现其能明显抑制 H T29 细胞 V EGF基因的表达 ,抑制率分别达 42 % 、 88% 、73%和 82 % 。结论 :针对 V EGF基因的 shRNA 表达载体能够明显抑制结肠癌细胞 V EGF基 因的表达 。 ( ) 关键词 　RNA 干扰 　血管内皮生长因子 V EGF 　结肠癌细胞 　Northern b lotting 中图分类号 　Q78 　　血管再生对于肿瘤生长超过 2 mm 至关重要 [ 1 ] , 虽 实验来筛选 , 以获得更有效的序列 , 因此 , 我们设计了 然许多生长因子参与肿瘤血管再生 ,但 V EGF ,特别是 本实验 ,拟通过 RNA 干扰抑制结肠癌 H T29 细胞 V EGF V EGFA 起着重要的作用 [ 2 ] 。V EGF 是一个 45 kD a 的 基因的表达 , 为下一步探讨 V EGF 基因在肿瘤发生和 肝素结合生长因子 ,可以被低氧诱导因子 1a 所诱导而 发展中的作用 , 以及抗肿瘤 RNA 干扰药物开发的研究 合成增 加 , 它 通 过 与 其 酪 氨 酸 激 酶 受 体 , 特 别 是 奠定基础 。 V EGFR 2 结合 ,参与血管再生的许多关键步骤 ,包括内 1　材料与方法 皮细胞增生 、侵蚀 、迁移和存活 , 以及血管的通透性 。 V EGF 可以被大多数肿瘤分泌 ,包括肺 、胃肠道 、肾、胸 1. 1　主要材料 腺 、膀胱 、卵巢和宫颈 , V EGF在体内的表达水平与肿瘤 　　质粒 p TZU 6 + 1, 内含人 U 6 启动子 Ⅲ, 由美 国 的进展和侵蚀相关 [ 3 ] 。 U n iversity ofM ich igan D r. D avid Engelke馈赠 ;结肠癌细 　　RNA 干扰技术仍然是 目前研究的热点 , 由于它们 胞 H T29 均由本实验室提供 ;细胞培养用血清为国产四 具有较强的序列特异性