大鼠局灶性脑缺再灌注时GDNF、iNOS在脑组织表达及其意义的实验研究.pdf

大鼠局灶性脑缺血再灌注时GDNF、iNOS在脑组织 表达及其意义的实验研究 摘 要 cellline—dedved 目的：观察胶质细胞源性神经营养因子(glial neuro．trophic nitric oxide 脑缺血再灌注中的相关性，为深入阐明GDNF、iNOS在脑缺血再灌 注中的作用和临床应用GDNF、iNOS抑制剂治疗缺血性脑血管疾病 积累资料，以期对缺血性脑血管疾病的防治开辟新的途径，为临床的 进一步研究和应用提供客观实验依据。方法：l、采用袁琼兰等人的 线检法制备脑缺血再灌注模型。用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉(middle cerebral 小时、72小时、120小时制成脑缺血再灌注模型，每组15只。正常 组大鼠5只，假手术组5只作为对照组。2、采用HE染色观察脑缺 制在动物麻醉清醒后再灌注24小时进行评分，观察神经功能缺失症 状。3、制作脑片并作TTC染色观察脑缺血或梗死情况，正常脑组织 染色观察GDNF、iNOS表达特点。根据显色的强弱，将免疫组织化 为强阳性。结果：I、模型制作过程中有8只大鼠死于术后2小时内 被排除进一步实验，实验组共有12只大鼠未出现偏瘫症状，这12只 大鼠排除实验。本实验模型闭塞成功率66．7％(61／90)。蛛网膜下腔出 占死亡大鼠的55．6％，大鼠死亡率18％。2、神经功能缺失症状评分： 正常对照组及假手术组0分，实验组2．6+0．25分。3、脑片染色见正 常组及假手术组脑片染色为红色，再灌注24小时组可见右侧大脑半 球白色梗死灶。4、可逆性大脑中动脉阻塞的缺血区位于视前区、纹 状体和额顶叶皮质，随着再灌注时间的延长，缺血区逐渐扩大，至24 小时缺血区扩展至整个大脑中动脉供血区，且视前区、纹状体的缺血 损伤比皮质重，缺血损伤区与周围组织分界清楚。HE染色肉眼可见 缺血损伤区为苍白色。再灌注3小时，缺血区有大量肿胀和深染的神 经元，可见少量呈圆形的凋亡细胞。再灌注12小时，纹状体有小片 状的淡染的无结构物质，同时额项叶皮质见有散在的鬼影细胞。再灌 注24小时，额顶叶皮质、纹状体、视前区出现梗死区，呈一片无结 构淡染区。再灌注48小时坏死中心区周围的缺血半影区有大量的凋 亡细胞，可见大量巨噬细胞浸润。再灌注3～5天缺血区内大部分坏死 的神经元溶解，缺血周边区有大量巨噬细胞。5、正常组和假手术组 未检测到GDNF的表达。再灌注3小时、再灌注12小时、再灌注24 小时、再灌注48小时、再灌注3天、再灌注5天，在整个再灌注过 程中GDNF阳性的细胞数在3小时达到高峰，后逐渐下降，各组与再 灌注3小时组比较P0．01。6、正常组和假手术组、再灌注3小时组 无iNOS阳性的细胞。再灌注12小时、再灌注24小时、再灌注48 小时、再灌注3天、再灌注5天，在整个再灌注过程中，脑组织iNOS 阳性细胞在再灌注12小时开始表达，再灌注24小时达到高峰，后逐 渐下降。再灌注12．120小时各组与正常组、假手术组、3小时组比较 二者之间无相关性。结论；1、改良的短暂局灶性大鼠脑缺血模型是 一种研究脑缺血再灌注损伤较理想的模型。2、脑缺血再灌注损伤是 一个渐进的病理改变过程，额顶叶皮质、纹状体，视前区的缺血性损 伤程度逐渐加重，再灌注24小时达高峰。3、脑缺血后再灌注，变性、 死亡的神经元不表达GDNF，缺血周边区和非缺血区神经元GDNF 表达明显增强，提示GDNF有促进神经元存活作用。4、缺血再灌注 时SGZ区的细胞表达GDNF，活化的小胶质细胞或巨噬细胞可能表 高峰，后逐渐下降，其细胞定位以小胶质细胞为主。iNOS与脑缺血 再灌注后期神经元损伤有明显关联。6、GDNF的神经保护作用与抑 制iNOS的表达无关，可能与抑制nNOS的活性有关。7、为临床早 期使用GDNF和iNOS抑制剂减少脑损害，提供了一定的参考价值。 关键词：脑缺血再灌注；胶质源性神经营养因子；诱导型一氧化 氮合酶；大鼠 A on and of studyexpression GDNFandiNOSin