小鼠ntES（移植胚胎干细胞）系的建立与鉴定人ES（胚胎干细胞）系建立的探索.pdf

小鼠ntES(核移植胚胎干细胞)系的建立与鉴定人ES(胚胎十细胞)系建立的探索 小鼠ntES(核移植胚胎干细胞)系的建立与鉴定 人ES(胚胎干细胞)系建立的探索 硕士研究生：蒋永华 指导老师：孙筱放教授 中文摘要 stem 治疗性克隆(therapeuticcloning)是胚胎干细胞技术(embryonic cell，ES cell)与核移植(nucleartransfer)技术的结合产生的不以生殖为目 的新技术，该项技术使许多目前医学上没有有效治疗方案的疾病重新获得治愈的 可能。 本研究拟先通过小鼠ES细胞的培养及核移植显微操作技术的练习，建立小 stem transfer cell．ntEScell)， 鼠核移植后胚胎干细胞(nuclear embryonic 再进一步探索人的ES细胞的培养及鉴定，来源于IVF低质量废弃胚胎的人ES 细胞系建系，为将来治疗性克隆试验的开展建立试验基础。 研究内容包括一下两个部分： 第一部分小鼠ntES细胞的建立及鉴定 第一节不同品系小鼠ES细胞系的建立与鉴定 研究目的 l探索建立小鼠ES细胞建系的有效方法。 2对建立的Es细胞系进行鉴定，嵌合体小鼠的获得。 方法 1建立小鼠的Es培养体系 1．1MEF饲养层的制备 取孕12．5～13．5d的I(M孕胎鼠，制备MEF，1011g／ml丝裂霉素C作用 2—3小时后，重新接种制作饲养层。 1_2小鼠囊胚的获取 采用两种方式获取囊胚：(1)dpc3．5-4．5冲洗子宫获取囊胚。(2)dpc2．5 天冲洗输卵管收集卵裂球，卵裂球体外培养获取囊胚。 1．3ICM原代培养 !：垦!生!!堡堡焦墅堕王塑堕!墨堕垄塞皇鳖塞△坠!墅堕王塑堕!墨堡兰塑塑室—— themousentES of TheestablishmantandcharacterizatiOn hEScelllines． ceU theestablishmantof lines，Toinvestigate M．D calldidate：YonghuaJiall吕 SlHl Supervisor：Pr0￡)(iao‰g medical Second co¨age The hospi协lofGu鲫gzhou，G哪gzllou peOple’s Abstract Thereantwo inour parts study： ntES ofthemouse PartI Theest叠bHshm—ntaⅡdcharacteI·ization