显微鉴别标准操作规程.doc

制定人 部门 职务 制定日期 年 月 日 审核人 部门 职务 审核日期 年 月 日 批准人 部门 职务 批准日期 年 月 日 分发部门： 变更历史记载： 修订号 修订原因 修订号 修订原因 显微鉴别标准操作规程 目的：建立 适用范围：适用于本公司 责 任：员、。 1仪器与用具 1.1 仪器 生物光学显微镜（应配有目镜测微尺和载物台测微尺，最好具2.5×或4×物镜头和偏光装置），显微摄影装置或显微描绘器，电脑联机装置及其图像处理软件，滑走切片机，小型粉碎机，台式离心机，超声仪等。 1.2 用具 1.2.1 放大镜，刀片，解剖刀，镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊），剪（眼科剪与手术剪），解剖针等。 1.2.2 载玻片，盖玻片。 1.2.3 酒精灯，铁三角架，石棉网，滴瓶，试管，试管架，滴管，玻璃棒（粗与细），乳钵，量筒等。 2试液 2.1 水合氯醛试液 此液为常用封藏液，也是软化剂。可使干缩的细胞膨胀而透明，并能溶解淀粉，树脂，蛋白质，叶绿素及挥发油等，加热后透化效果更为明显。 2.2 甘油醋酸试液 此液为常用封藏液。专用于观察淀粉粒形态，可使淀粉粒保持原形，便于测量其大小。 2.3 甘油乙醇试液 此液为封藏液，也是软化剂。常用于保存植物性材料及临时切片，有软化组织的作用。 2.4 苏丹Ⅲ试液 此液可使木栓化，角质化细胞壁及脂肪油，挥发油，树脂等染成红色或淡红色。 2.5 辽红试液 此液可使粘液染成红色。本液应临用新制。 2.6 间苯三酚试液 此液与盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。 2.7 碘试液 此液可使淀粉粒染成蓝色或紫色；蛋白质或糊粉粒染成棕色或黄棕色。 2.8 硝铬酸试液 此液为常用的“植物组织解离液”。解离浸泡时间，按样品的质地不同而异。 2.9 α-萘酚试液 此液可使菊糖染成紫红色，并很快溶解。 2.10 硝酸汞试液 此液可使糊粉粒染成砖红色。 2.11 氯化锌碘试液 此液用于检查木质化与纤维素细胞壁，前者显黄棕色，后者显蓝色或紫色。 3 药材和饮片显微制片 3.1药材显微制片 3.1.1横切片或纵切片制片 取供试品欲观察部位,经软化处理后,用徒手或滑走切片法,切成10～20um薄片，必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它试液1～2滴，盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。 3.1.2粉末制片 供试品粉末过四号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。必要时，按上法加热透化。 3.1.3表面制片 将供试品湿润软化后,剪取欲观察部位约4mm2，一正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的的试液或加热透化后，盖上盖玻片。 1.1.4解离组织制片 将供试品切成长约5㎜、直径约2㎜的段或厚度约1㎜的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。 （1）氢氧化钾法 将供试品置试管中，加5%氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。 （2）硝铬酸法 将供试品置试管中，加硝铬酸试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。 （3）氯酸钾法 将供试品置试管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡较少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。 3.1.5 花粉粒与孢子制片 取花粉、花药（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸入冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酐与硫酸（9：1）的混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖片，或加50%甘油与1%苯酚各1～2滴，用品红甘油胶[取明胶1g，加水6 ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g，加无水乙醇600 ml及樟油80 ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得]封藏。 3.1.6磨片制片 坚硬的动物、矿物类药，可采用磨片制片法。选取厚度约1～2㎜的供试材料，置粗磨石（或磨砂玻璃板）上，加适量水，用食指、中指夹住或压住材料，在磨石上往返磨砺，待两面磨平，且厚度约数百微米时，将材料移置细磨石上，加水，用软木塞压在材料上，往返磨砺至透明，用水冲洗，再用