活动5光合色素的提取和分离分析报告.ppt

* 第三章 细胞的代谢 活动5：叶绿体中光合色素的提取和分离 一、实验原理 ①色素的提取：绿叶中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇中，故用无水乙醇可以提取绿叶中的色素。 ②色素的分离：不同色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸条上的扩散速度不同，故可用层析液将不同的色素分离。 二、实验步骤 实验材料：新鲜的绿色叶片（如菠菜叶片） （1）色素的提取： 95%乙醇+二氧化硅+碳酸钙 ①称取5g新鲜绿叶，剪碎，放入研钵中。②加入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入3 mL 95%乙醇。③在研钵中充分、快速研磨。④将研磨液用漏斗进行过滤。⑤收集滤液于试管内并用棉塞将试管口塞紧。 （2）制备滤纸条： 将预先干燥过的定性滤纸剪成10cm长、1cm宽的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两个角，并在距这端1cm处用铅笔画一条细的横线。 干燥的定性滤纸 （3）画滤液细线（点样）： 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔画的横线均匀地画出一条细而直的滤液细线。待滤液干燥后再重复画3-4次。 毛细吸管 （4）色素的分离（纸层析法）： ①将3 mL层析液沿烧杯壁的一侧倒入烧杯中。 ②将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微斜靠烧杯内壁的另一侧，轻轻地插入层析液中。 ③用培养皿盖盖上烧杯（防止层析液挥发）。 特别注意：滤纸条的滤液细线要高于层析液液面，不能让滤液细线接触层析液。 层析液=石油醚+丙酮+苯 溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢 三、实验结果 ①色素带的条数—色素的种类；②色素带的宽窄—色素的含量；③色素带的位置—色素的溶解度。 切记：①含量最多-叶绿素a，含量最少-胡萝卜素； ②溶解度最大-胡萝卜素，溶解度最小-叶绿素b。 扩散速度 溶解度 含量 颜色 叶绿素b 胡萝卜素 叶绿素a 叶黄素 色素种类 橙黄色 黄色 黄绿色 蓝绿色 最少 较少 最多 较多 最高 最快 最低 最慢 较高 较快 较低 较慢 防止色素直接溶解到烧杯内的层析液中 滤液细线不能触及层析液 增加色素的含量，使分离后的色素带清晰，便于观察 滤液细线干燥后重复画3-4次 使分离的色素带平整、不重叠 滤液细线要细、直、齐 避免两边扩散过快，保证色素带平整 研磨充分和防止叶绿素被酸性物质破坏 溶解并提取叶片中的色素 使滤液中色素含量较高 操作目的 注意事项 滤纸条下端剪去两个角 研磨时加入少许SiO2和CaCO3 研磨时加入3mL 95%乙醇 选取新鲜的绿色叶片 四、注意事项 *