dek蛋白c末端dna结合域的原核表达、纯化及其与dna的结合活性.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（８）：１４～１８ ＤＥＫ蛋白Ｃ末端ＤＮＡ结合域的原核表达、 纯化及其与ＤＮＡ的结合活性 １ １ 华　颖 　胡红刚 　彭向雷 （北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院　北京　１０００４４） 摘要　ＤＥＫ蛋白Ｃ末端ＤＮＡ结合域（简称ＣＤＢ）是近年新发现的一个ＤＥＫ蛋白与ＤＮＡ的结合 域，其中含有多个磷酸化位点，与ＤＥＫ蛋白的功能密切相关。利用原核表达系统表达ＤＥＫ蛋白 的ＣＤＢ肽段并进行纯化，具体为以ｐＥＴ３０ａ（＋）为载体质粒，Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）为宿主细胞，构 ? 建重组基因工程菌，以ＩＰＴＧ诱导目的蛋白的表达，用ＮｉＮＴＡ纯化的重组蛋白样品来进行 ＳＤＳ ? ? ＰＡＧＥ电泳分析，约在 １０．７ｋＤａ处出现明显的特征蛋白条带。凝胶迁移分析证实ＤＥＫ蛋白Ｃ末 端ＤＮＡ结合域与ＤＮＡ的结合倾向于与超螺旋型ＤＮＡ相结合，同全长的ＤＥＫ蛋白与 ＤＮＡ的结 合具有类似的特点，表明ＤＥＫ蛋白Ｃ末端ＤＮＡ结合域在ＤＥＫ蛋白与ＤＮＡ的结合中可能具有一 定的作用。 关键词　ＤＥＫ蛋白　Ｃ末端ＤＮＡ结合域　原核表达　纯化　凝胶迁移实验 中图分类号　Ｑ８１９ 　　ＤＥＫ蛋白是一种含量丰富的染色质架构蛋白，既 Ｋａｐｐｅｓ等研究者于２００４年发现的，这一结合域含有多 存在于多细胞生物中，也存在于一些单细胞生物中，但 个磷酸化位点，它的磷酸化能促使蛋白之间相互聚集， ［１］ 同时降低ＤＥＫ蛋白与ＤＮＡ的亲合力［１，１４，１５］。 尚未在酵母中发现 。人类的ＤＥＫ蛋白首先发现于 一种急性白血病的亚型［２］。随后，发现ＤＥＫ蛋白是幼 　　可见，ＤＥＫ蛋白的 Ｃ末端 ＤＮＡ结合域 ＣＤＢ在 年类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病等几种自 ＤＥＫ蛋白的磷酸化、调节 ＤＥＫ蛋白的聚合以及 ＤＥＫ ［３～５］ 蛋白与ＤＮＡ的相互作用中具有一定的作用。因此，有 身免疫病的共同抗原 。在膀胱癌、宫颈癌、恶性胶 质瘤、成年人急性白血病等侵袭性肿瘤中，ＤＥＫ蛋白均 关ＤＥＫ蛋白Ｃ末端ＤＮＡ结合域ＣＤＢ功能的研究则具 ［６～８］ 有重要的意义。目前，国内外有关原核表达ＤＥＫ蛋白 出现过表达 。ＤＥＫ蛋白在细胞中的作用日益受到 研究者的关注。 Ｃ末端ＤＮＡ结合域ＣＤＢ及其与ＤＮＡ结合的研究尚未 ［９，１０］ 见报道，本研究的目的是采用原核表达系统，表达ＤＥＫ 　ＤＥＫ蛋白主要分布于细胞核的常染色质中 ，其 与ＤＮＡ的结合具有结构特异性，倾向于与超螺旋或十 蛋白Ｃ末端ＤＮＡ结合域（融合蛋白ＨｉｓＣＤＢ），对其进 字形ＤＮＡ相结合，而不是特异性地与特定的ＤＮＡ序列 行纯化，并进一步研究其与 ＤＮＡ的结合活性，为以后 ［１１］ 的研究奠定基础。 相结合 。不同物种的ＤＥＫ蛋白的长度不同，但都有 一共同的与ＤＮＡ相结合的区域———ＳＡＰ／ＳＡＦ域（ＳＡＰ １　材料与方法 ［１２，１３］ ｂｏｘＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ） 。ＤＥＫ蛋白Ｃ末端ＤＮＡ ? １．１　材　料 结合域（ｃａｒｂｏｘｙｔｅｒｍｉｎａｌＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，ＣＤＢ）是迄 ? ?