中风康抑制局灶脑缺血大鼠炎性损伤的作用机制研究.pdf

中文摘要 中风康抑制局灶性脑缺血大鼠炎性损伤 的作用机制研究 摘 要 目的：在建立局灶性脑缺血大鼠模型基础上，通过动物 实验，验证中风康抗局灶性脑缺血，缩小脑梗死体积的疗效， 并从抑制炎性损伤的角度探讨其作用机制。 方法 第一部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积和病 理组织学的影响 1．中风康对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积的影响 健康SD大鼠，体重250～3009，大鼠随机分为4组， 即模型组、中风康高剂量组(简称高剂量组)、中风康低剂 量组(简称低剂量组)、步长脑心通对照组(简称脑心通组)， 每组每时间点取8只大鼠。高、低剂量组和脑心通组从术前 5天至处死前每天灌胃给药，剂量分别为：中风康高剂量组 模型组予O．5％的羧甲基纤维素钠液灌胃，一日一次。 参照文献，采用线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血模 型，大鼠腹腔内注射10％水合氯醛(350mg／Kg体重)麻醉后， 仰卧固定，颈部正中切口，分离并暴露右侧颈总及颈内、外 动脉，并在颈内外动脉分叉处结扎颈外动脉，右侧颈总动脉 剪口，插入头端烧成圆钝形直径为0．25mm的尼龙鱼线，进 线长度约18～19mm，在大脑中动脉起始端堵塞大脑中动 脉，然后将颈总动脉连同尼龙鱼线一起结扎，缝合皮肤，放 中文摘要 回笼内，单笼喂养。假手术组只分离、暴露血管，不结扎颈 总动脉及颈外动脉，不插入尼龙鱼线。选择苏醒后左上肢屈 曲、行走时向左侧旋转或左侧肢体瘫痪的大鼠为栓堵成功者 进行实验，否则视为栓堵失败，弃之不用。手术过程中监测 大鼠直肠温度，并用电热毯保持在36．5～37．5℃。 于造模成功后6h、12h、24h、48h检测各组大鼠脑梗死 体积的变化。动物麻醉，断头取脑。脑组织冷冻后间隔lmm 连续冠状位切片，加入2％的TTC染色，37℃恒温孵育30min， 正常脑组织染为深红色，脑梗死区不染色，呈灰白色，再置 于2％多聚甲醛磷酸缓冲液固定24h。剥离脑片的梗死区部分， 按文献用排水法测脑梗死体积。 2．中风康对局灶性脑缺血脑病理组织学的影响 健康SD大鼠，体重250～3009，大鼠随机分为5组， 即假手术组、模型组、中风康高剂量组(简称高剂量组)、 中风康低剂量组(简称低剂量组)、步长脑心通对照组(简 称脑心通组)，每组取5只大鼠。给药剂量同上，假手术组、 予O．5％的羧甲基纤维素钠液灌胃，一日～次。 造模方法同上，造模成功后48h，处死各组大鼠，取右 侧大脑额顶叶脑皮质组织，10％的甲醛固定，乙醇逐级脱水， 石蜡包埋，切片机切片，HE染色，光镜观察并摄像。 forWindows 数据采用均数4-标准差(i士s)表示，用SPSS 10．0统计软件处理，多组比较先采用单因素方差分析，然后 用Student-Newman．Keuls Test进行每两组问比较；两组比较 采用t检验。 第二部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织TNF—Q、 IL．8含量的影响 中文摘要 动物分组、造模方法、用药情况同前，造模成功后分别 于6h、12h、24h、48h麻醉各组大鼠，断头取右侧大脑，去 除小脑和延髓部分，称重后移入玻璃匀浆管中，加入9倍体 积的预冷生理盐水，冰盘上充分研碎，使组织匀浆化。制备 各组大鼠TNF．Q、IL．8含量的变化。 用放射免疫法检测TNF一Ⅱ、IL．8含量，并用脑组织蛋 白含量校正。 第三部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织ICAM．1、 MMP一9的影响 动物分组、造模方法、用药情况同前，造模成功后分别 于6h、12h、24h、48h麻醉各组大鼠，断头取右侧大脑，去 除小脑和延髓部分，称重后移入玻璃匀浆管中，加入等倍体 积的预冷生理盐水，冰盘上充分研碎，使组织匀浆化。制备 好的50％匀浆3500r／min离心10min，提取上清待测。 的OD值，MMP．9浓度与OD值成正比，用酶标仪测得OD 值间接反映其量的变化。 结果 第一部分