2015-2016高中生物专题5课题1DNA的粗提取与鉴定新人教版选修1解读.ppt

(2)实验步骤 1号试管 2号试管 加入2mol/L NaCl溶液 5mL 5mL 丝状物(DNA) 不加 加入 用玻璃棒搅拌 无 丝状物溶解 加入二苯胺试剂 4mL 4mL 沸水浴 5min 5min 观察现象 不变蓝 变蓝 温馨提示：①获取材料时，选取含DNA多的材料，如鸟类的红细胞，不用哺乳动物的红细胞(无细胞核)。 ②盛放鸡血细胞的容器最好用塑料容器，玻璃容器容易吸附DNA。 ③在以植物细胞为原料获取DNA时，要使用洗涤剂和食盐，洗涤剂的作用是瓦解细胞壁，释放DNA；食盐的作用是溶解DNA。 ④在提取DNA时，用玻璃棒搅拌含有悬浮物的溶液时，不要直插烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。 ⑤二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定结果。 在DNA粗提取与鉴定实验中，将第二次过滤获得的纱布上含有的DNA的黏稠物(含有较多杂质)分别处理如下： 上述操作正确的是(　　) A．①② B．①②③ C．①③ D．②③ 序号 操作过程 ① 放入2mol/L的NaCl溶液，搅拌后过滤 ② 再加入0.14mol/L的NaCl溶液，搅拌后过滤 ③ 再加入冷却的、同体积的95%酒精溶液，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物 [解析]　第二次过滤后纱布上的是粗提取的DNA，此DNA还含有杂质，因此将其溶于2mol/L的NaCl溶液中，再进行过滤，以除去不溶于2mol/L的NaCl溶液的杂质。然后向滤液中加入同体积的、冷却的95%酒精即可析出DNA。然后挑出DNA进行鉴定。答案为C。 [答案]　C DNA的粗提取中，加入与滤液体积相等的、冷却的A溶液，静置2min～3min，溶液中会出现白色丝状物。上面的A溶液是指(　　) A．0.9%的NaCl溶液 B．0.14mol/L的NaCl溶液 C．质量分数15%的HCl D．体积分数为95%的酒精溶液 [答案]　D [解析]　DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精溶液，故滤液与体积分数为95%的冷却的酒精溶液混合后，就会得到白色的丝状物。 思 维 创 新 升 华 1．实验操作步骤中三次过滤的比较 过滤液 过滤后 纱布上 滤液中 1 加蒸馏水 的细胞滤液 细胞膜、核膜、 糖类、蛋白质等 含杂质的DNA 2 浓度为2mol/L 的NaCl溶液 不溶于2mol/L NaCl溶液的杂质 含杂质较 少的DNA 3 浓度为0．14mol/L 的NaCl溶液 DNA 溶于0.14mol/L NaCl溶液的杂质 2.DNA粗提取与鉴定的原理、方法、目的 基本原理 方法 目的 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 溶于NaCl溶液中并稀释 ①NaCl浓度为2mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质 基本原理 方法 目的 DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质 DNA不溶于酒精溶液 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 DNA可被二苯胺染成蓝色 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA 3.实验操作的关键及注意事项 1．选用鸡血做实验材料(不能用哺乳动物成熟红细胞) (1)鸡血经济且易制得，鸡血中的红细胞、白细胞都具有细胞核，含大量DNA。 (2)制备鸡血细胞液时，离心后要除去上清液。因为血液分两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞。离心后除去的是血浆。 2．实验中两次加入蒸馏水的作用不同 (1)第一次加蒸馏水的目的是为了使外界溶液浓度低于血细胞内的浓度，使血细胞胀破，释放出DNA。 (2)第二次加蒸馏水的目的是降低NaCl溶液的浓度，使DNA的溶解度达到最低点，尽量析出溶液中的DNA。 3．实验中共有三次过滤 过滤时，使用的纱布层数与获取滤液或黏稠物有关。第一、第三次要获取滤液，使用1～2层纱布；第二次要获取黏稠物，应使用多层纱布。 4．实验中有六次搅拌 除最后一次搅拌外，前五次搅拌都应朝一个方向，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取过程中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。 5．实验中出现的丝状物 实验中出现的丝状物是DNA，但它的直径比DNA分子的直径大许多倍。实际上丝状物中的每一根“丝”，都是由许多DNA分子聚集在一起形成的，所以丝状物的直径大小并不表示一个DNA分子直径的大小。 特别提示：①为防止血液凝固，可在鸡血中加入柠檬酸钠。 ②沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中(5℃以下)至少存放24h。 ③为减少DNA的损耗，所有过滤过程