斜带石斑鱼肠道乳酸菌部分生物学特性研究分析.doc

斜带石斑鱼肠道乳酸菌部分生物学特性研究 摘要: 体外检测了 3 株斜带石斑鱼( Epinephelus coioids) 肠道乳酸菌的产乳酸能力、抑菌活性、对高温、低 pH 值、高胆盐、人工胃液及人工肠液的耐受能力等，为海水鱼益生菌的开发提供理论依据．16S rＲNA 基因测序分析表明，LS61、LS64、LS77 菌株分别为植物乳杆菌( Lactobacillus plantarum) 、肠膜明串珠菌( Leuconostoc mesenteroides) 、糊精乳杆菌( Lactobacillus dextrinicus) ． 3 株菌摇瓶培养40 h 后发酵液中乳酸含量分别达到 55. 6、51. 6、58. 3 mmol / dm3且发酵上清液对致病菌有较强的拮抗活性． 耐受性实验结果表明，pH 值为 3. 5、4. 5 的 MＲS 培养基对这 3 株菌存活影响较小; pH 值为2. 5 的 MＲS 培养基对 LS64、LS77 的影响较大，而对 LS61 菌株的存活基本没有影响． 这 3 株菌对不同 pH 值的人工胃液的耐受性与之相似，说明 LS61 菌株的 pH 值耐受性最好，其次是 LS64 菌株，LS77 菌株最差． 3 株菌对高胆盐也有不同的耐受性，含 1‰和 2‰胆盐的 MＲS 培养基对 3 株菌的影响较小，而在3‰的胆盐处理4. 5 h 后，LS64 菌株的存活率仍保持在30. 7%，LS61 菌株的存活率为2． 0% 左右，LS77 菌株的存活率接近 1． 0% ． 在 4‰的胆盐含量下，LS61、LS64 菌株的存活率仍高于1‰． 同样，不同胆盐含量的人工肠液对这 3 株菌的影响与之相似． 乳酸菌 LS61、LS64 菌株具有较强的产乳酸和抑菌能力，具有一定的 pH 值耐受性和较高的胆盐耐受性，可考虑作为潜在的益生菌株应用于水产健康养殖． 关键词: 海洋生物学; 斜带石斑鱼; 乳酸菌; 抑菌活性; pH 值; 胆盐; 益生菌 随着石斑鱼养殖的兴起和高速发展，在带来巨 大经济效益的同时也出现了一些问题． 石斑鱼细菌 性疾病和寄生虫病害严重，抗生素等药物的频繁使 用导致致病菌耐药性的增强，解决这些问题就需要 探寻一种绿色的养殖模式，需要一种高效生态的方 法来控制细菌性病害． 因此，许多科学家都期望利用 微生物之间的拮抗作用预防和治疗石斑鱼细菌性疾 病 ［1-3］ ． 乳酸菌作为益生菌已被广泛应用于人体的保健 医疗、健康和食品等多个方向． 如 Youn 等( 2012) 用 流感病毒感染 BALB/c 小白鼠，发现活的乳酸菌对 增强免疫有显著效果，提高了小白鼠的存活率 ［4］ ． Matsumoto 等( 2006 ) 研究证实含乳酸菌的牛奶对 稳定人体肠道环境和微生物菌群具有积极作 用 ［5］ ． Burns 等( 2012) 从奶酪中分离得到 2 株乳酸 菌，将其用于发酵奶酪，与不加乳酸菌的对照组进 行氨基酸含量、食品风味等进行比较，发现添加乳 酸菌发酵的奶酪中氨基酸含量和风味明显好于对 照组 ［6］ ． 乳酸菌在畜禽养殖上的应用也取得了较 大进展，如 Zhang 等( 2012) 发现罗伊乳酸杆菌 ( Lactobacillus reuteri) 能提高患白痢雏鸡的存活 率 ［7］ ． 此外，乳酸菌在水产养殖上的应用也取得了 一定成果，如刘倩等( 2006) 阐述了乳酸菌对提高 鱼类抗病力、生长速度和存活率的重要作用 ［8］ ; Lara-Flores 等( 2003 ) 发现将粪链球菌 ( Streptococ- cus faecium) 和嗜酸乳杆菌 ( Lactobacillus acidophi- lus) 添加到饲料中投喂可以促进尼罗罗非鱼( Ore- ochromis niloticus) 鱼苗的生长，提高饲料利用率 等 ［9］ ; Suzer 等( 2008) 研究发现，乳杆菌投喂处理 等显著提高金头雕( Sparus aurata) 幼体的存活率、4 期 陈艳武，等: 斜带石斑鱼肠道乳酸菌部分生物学特性研究 ·531· 特定生长率和肠道酶活 ［10］ ． 尽管乳酸菌在水产养殖上应用的报道不少，但 是，由于缺乏真正适合水产动物的益生菌株，目前许 多水产上使用的益生菌分离自环境或者陆生动物， 这些益生菌往往因为无法在水产动物消化道存活而 不能发挥益生效果，因而限制了它们在水产养殖上 的应用． 理想的益生菌应该来自动物自身胃肠 道 ［11-13］ ． 此外，所选用的益生菌还必须能够耐胃肠 内强酸、高胆盐的环境，才能够在消化道内大量存 活、定植，发挥益生作用 ［14-15］ ． 本文通过分离斜带石斑鱼( Epinephelus coioids) 肠道的乳酸菌，对其部分生物学特性，包括产乳酸的