无菌检查法(药检所文摘).docVIP

无菌检查法 第一讲2000版药典无菌检查法增修订内容概述 无菌检查法是针对无菌制品的无菌性而建立起来的一套检查方法，早在19世纪初就列入了药品检查的要求项目，在人们不断实践的过程中，其方法也在不断地改进和提高，检查的范围和内容也逐步扩大。中国药典2000版就取样量、培养基质量、无菌环境、无菌操作技术等方面有大幅度的增订和修订，具体概括如下： 1扩大了检验范围：以往的无菌检查仅适用于药品及敷料，本次修订增加了肠线、缝合线及无菌器具，这就使一次性注射器、一次性输血输液器等有了切实可行的检验方法。 2对无菌检查的操作环境提出了明确的要求，规定操作应在100级单向流空气区域内进行，并且对单向流空气区与工作台面要进行验证。 3培养基： 在提法上将霉菌培养基更名为真菌培养基。因为霉菌培养基上常有酵母菌生长，霉菌和酵母菌都不是分类学上的名词，而只是一个形态学类群，是一种俗称，被习惯称为霉菌和酵母菌的两大类群微生物属于真菌门。将霉菌培养基更名为真菌培养基能更确切地反映这一培养基的适用范围。 在制法上提出可按药典规定的处方自制，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。使用脱水培养基（合成培养基）可大大节省我们的工作量和工作时间，但应注意使用应严格按说明进行，灭菌温度和时间统一规定为115℃30分钟，同时注意pH值的变化，并逐批对培养基进行灵敏度检查。 培养基灵敏度检查：这是对培养基的质量性能进行检验的一个试验。此次修订增加了制备稀释菌液的一种方法，即直接稀释法，新增的第二法直接稀释法较第一法（比浊法）简单，人为误差小。对两种稀释法，2000版药典都规定了菌液的最终浓度为10~100个/ml而放弃了稀释级的提法，因此培养基接种管数减少，简化了工作量，明确了结果判断。 4对照用菌液: 对照用菌液是无菌检查实验中加入阳性对照管的菌液2000版药典对此项的改动与灵敏度实验相一致也是将菌液的稀释级10-6改为最终稀释浓度100个/ml 将金黄色葡萄球菌的接种培养基由需厌气培养菌改为营养肉汤培养基。 5抑细菌和抑真菌实验 此项实验为本次修订时增设。在用直接接种法进行无菌检查前，要测定供试品的抑菌性。增设该项实验是适应当前大量新药涌入临床，对这类药品进行无菌检查时，往往对其是否具有抑菌作用没有把握，如果其有抑菌性，就会造成我们检验结果的假阴性，国外药典都在无菌检查中设有此项内容。我国2000版药典增设该项内容，虽延长了无菌检查时间，但可以减少方法选择上的盲目性。因此具有很重要得意义。 6检查法 在检查法的序言中，明确规定了直接接种法和薄膜过滤法的适用范围，前者适用于非抗菌作用的供试品，后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。 在进行无菌检查前，提出用适当的消毒液对供试品容器表面或外包装浸没或擦拭消毒。2000版药典把它作为一个实验步骤提出来，较95版更明确具体。 （1）直接接种法：将95版的七大类供试品进行了简并（如23条简并为一条）；增设了内容（如外科敷料中增设了肠线、缝合线；又专项增设了灭菌医用器具一条）；调整了次序（将有抑菌作用和抗生素类药品从直接接种法中删除，而其相应的内容在薄膜过滤法中体现出来）。对青霉素类药品叙述了两种方法都可使用，而不是只用酶法；放射性药品没有变更。经过调整，最终将供试品归纳为六类，调整后的款项，内容丰富，归类合理。 在直接接种法中，最大的变动是取样量的增加和培养基管数的增加，这是本次修订无菌检查法的重要改动，并为此专门增设了表格附后。从理论上讲当某批产品染菌率一定时检出有菌的概率随样本数量的增加而增加95版进行无菌检查时一般取用2个容器在这种样本数下通过无菌检查的可能性很大而这时所下的无菌结论其假阴性率比较高2000版将取样量增加到11个容器接种量从全量到5ml不等对敷料由原两个包装增加到4个包装原来剪取以面积计改为以重量计或面积计。培养基接种管数由原来的共7管调整到共11管其中真菌培养管由原来的2管增加到5管培养时间均设为7天延长了细菌原来5天的培养时间这样的修订统一了细菌和真菌的操作提高了阳性检出率。 对加入供试品后培养基出现浑浊这一情况的处理方法2000版药典明确规定经7天培养后可转种或可显微观查而不是两种方法同时使用。 （2）薄膜过滤法: 本法将取样量由2支增加到6支将供试品由抗生素类药品、抗厌氧菌药品、抗真菌药品统一规定为有抗菌作用的药品并统一操作只是在加入阳性对照菌时根据供试品的特性加入不同的菌液，在冲洗时没有统一规定冲洗次数及冲洗剂用量而以冲洗至阳性对照菌能生长为标准这就需要依靠经验来操作。阳性对照菌生长出来的时间规定为细菌24~48hr真菌24~72hr。 在使用的仪器装置上既可使用传统的装配式滤器也可使用封闭式滤器后者是本次修订时新出现的仪器由于推荐使用的JBY-Ⅲ型电脑集菌仪有三组培养基分别培养细菌、真