条斑紫菜多糖提取纯化其体外抗肿瘤活性研究分析.doc

条斑紫菜多糖的提取纯化及其体外抗肿瘤活性研究 摘要 本文优化了超声波或微波辅助同时提取条斑紫菜(尸口rP妙rayezoensis夕多糖和藻 红蛋白的工艺,采用三氛乙酸和藻胆蛋白变性温度结合的方法去除蛋白,并用膜分离 技术对多糖进行初步分离,根据带电性质和分子量采用DEAEC一52和SePhadexG一100 纯化出三种不同的多糖组分PYPSlla!PYPSla和PYPSZa,研究了这三种多糖的结 构,单糖组成及PYPSlla和PYPSZa这两个多糖组分的Invitro杭肿瘤活性.主要研 究结果如下: 1!本文首次明确提出超声波辅助同时提取条斑紫菜多糖和藻红蛋白的最佳提取 条件为:超声6Omin,功率88OW,30e水浴4h,料液比1:50,多糖提取得率为34.03%, 藻红蛋白提取得率为1.20%,藻红蛋白纯度为0.356 2!本文首次明确提出微波辅助同时提取条斑紫菜多糖和藻红蛋白的最佳提取条 件为:微波4min,功率巧OW,30e水浴sh,料液比l:40,多糖提取得率为16.94%, 藻红蛋白提取得率为0.417%,藻红蛋白纯度为0.255与对照(30e水浴sh,料液比 1:40,多糖提取得率为10.50%,藻红蛋白提取得率为0.324%,藻红蛋白纯度为0.215) 相比,超声波辅助提取多糖提取得率增加23.5%,微波辅助提取多糖提取得率增加 6.4% 3!本文研究得出了三氛乙酸和藻胆蛋白变性温度结合法去除蛋白的最佳条件为: 三氯乙酸浓度2%,50e处理20min,蛋白清除率99.63%,多糖保存率90.49%,与传 统的三氛乙酸除蛋白法(三氯乙酸浓度3%放置lh,蛋白清除率为91.24%,多糖保存 率为82.84%)相比,三氛乙酸和藻胆蛋白变性温度结合法去除蛋白效果更好,蛋白清 除率增加8.39%,多糖保存率增加7.65% 4!通过对超滤膜孔径的筛选,确定截留分子量分别为50kDa和3kDa的膜采 用DE规e一52和s叩hadexe一100对50kDa和3kDa两个条斑紫菜多糖(P钾S)组分 进行纯化,得到三个单一多糖组分PYPSna!PYPSla和PYPSZao 5!紫外光谱分析表明PYPSlla!PYPSla和PYPSZa不含核酸和蛋白质,是单一 组分红外光谱解析表明PYPSlla!PYPsla和PYPSZa呈现出多糖的特征吸收峰, 均为毗喃糖且含有硫酸基和3.6一内醚桥气相色谱法分析表明PYPSla和PYPSZa均 由L一鼠李糖!D一半乳糖及三种未知单糖组成,半乳糖与鼠李糖的摩尔比分别为30:1 和12.8:1;PYPSlla是由L一鼠李糖!D一半乳糖及四种未知单糖组成,半乳糖与鼠李糖 的摩尔比为6.6:L 6!PYPSlla和PYPSZa对人肝癌细胞A549的Invitro生长均有一定程度的抑制 作用,并呈剂量依赖关系,在lm留mL时抑制率分别为43.1%和30.0%. 关键词:条斑紫菜;多糖;提取;分离纯化;结构分析;杭肿瘤活性 EARCHONEXTRACTION,PURIFICAI,IONANDLV叮TRO ANTITUMORACTIVITYOFP01万SACCHARIDES FROMPOR只甘月汉 ABSTRACT Theultrasonie一assistedormierowave一assisteds担ehronousextractionParametersof PolysaeeharideandPhyeoeryt断nfromPorphyrayezoensiswereoPtimized.Triehloroaeetie aeid(TCA)eombinedwiththedenaturationteirlPeratureofphycobiliproteinwasusedto removeProteinandmembraneseParationteclmologywasusedtoisolatethe Polysaecharides.ThreedifferentP而fiedfractionsPYPSIla!PYPSlaandPYPSZawere furhterobtainedbasedontheirdifferentehargeeharaeteristieandmolecularweightby DEAEC一52andSephadexG一100ehromato9即hv,respeetivel丫Thebasies加cturesof threemainfraetions,monosaceharideeompositionsandantltumoractivityofPYPS11aand PYPSZainvitrowerealsoinvestigatedinthePaPer.ThePrimaryresearehresult