樟科药用植物山鸡椒化学成分和药理活性研究分析进展.docVIP

描述：山鸡椒是樟科木姜子属植物，其根、茎和果实均可入药，具有祛风散寒、理气止痛等功效，在民间应用广泛。该植物主要含有生物碱类，特别是阿朴啡生物碱，也含 有少量的黄酮、木脂素及其他类成分。相关药理研究显示，山... 2.4?数据分析?　　qRT-PCR结束后，使用ABI?7500定量分析仪自带软件Version?2.0.1自动进行数据分析，得到各样品的Ct，?用geNorm，NormFinder，BestKeeper，Delta?CT法，同时登陆利用RefFinder对各内参基因的稳定性进行分析。geNorm软件先计算出每个候选内参基因的稳定性值（M），然后计算某一内参与?其他内参的配对变异系数（pairwise?variation），即Vn/n+1。通过M对候选内参基因的稳定性进行排序以及Vn/n+1判定所需内参基因的最适数目。NormFinder软件结合组内方差与组间方差，计算出稳定值（stability?value?），根据稳定值的大小对内参基因的稳定性进行评价。geNorm软件与NormFinder软件在分析数据的数据时，期刊 论文 3.3.2?NormFinder分析?利用NormFinder程序分析Actin，18S?rRNA，PAL，GAPDH，CPR的基因表达稳定性，其稳定值依次为0.341，0.462，0.505，0.533，1.336，根据稳定值越小则?基因表达越稳定的原则，内参基因稳定性由高到低依次为Actin18S?rRNAPALGAPDHCPR，与geNorm程序分析结果基本一致，即在不同浓度镉处理下Actin的表达最为稳定，CPR?稳定性最差。?　　3.3.3?BestKeeper分析?利用BestKeeper软件分析候选内参基因表达稳定性，其SD大小顺序依次为18S?rRNAGAPDHActinPALCPR，根据使用SD评估内参基因稳定性的原则，SD越小内参越稳定。因此在不同浓?度镉处理下18S?rRNA的表达最稳定，CPR稳定性最差。对比上述2种分析方法，BestKeeper与geNorm和NormFinder的分析结果存有差异。?　　3.3.4?Delta?CT分析?采用Delta?CT法分析Actin，18S?rRNA，PAL，GAPDH，CPR的基因表达稳定性，通过计算各内参基因的平均标准偏差（Mean?Std?Dev），对基因的表达稳定性进行排序，平均标准偏差越小，表明基因稳定性越高，见表3。结果显示，黄花蒿在不同浓度镉处理下内参基因表达稳定性由高到低?依次为Actin18S?rRNAPALGAPDHCPR，即在不同浓度镉处理下Actin的表达最为稳定，CPR稳定性最差。分析结果与geNorm和?NormFinder的分析结果基本一致，但与BestKeeper分析结果有一定差异。?　　表3?内参基因配对比较?　　Table?3?Pairs?of?reference?genes?comparison?　　注：平均ΔCt表示配对基因在21个样品中平均差异，标准偏差代表配对基因在21个样品中Ct的变异。?　　3.3.5?RefFinder分析?RefFinder是基于Web开发的在线分析工具，集合了上述4种计算程序和方法（geNorm，NormFinder，BestKeeper软件以及Delta?CT法），操作简单。登陆并将Ct直?接输入到程序中，点击“Analyze”按钮，即可得出各内参基因的稳定性排名，其中将计算各内参基因排名（由?geNorm，NormFinder，BestKeeper软件以及Delta?CT法分别得到的排名）的几何平均数作为综合排名。黄花蒿在不同浓度镉处理下内参基因表达稳定性由高到低依次为Actin18S?rRNAPALGAPDHCPR，见图3。?　　图3?RefFinder分析不同浓度镉处理下5种内参基因的稳定性?　　Fig.3?Gene?expression?stability?and?ranking?of?the?five?reference?genes?as?calculated?by?RefFinder?in?all?tested?samples?under?different?concentrations?of?Cd?　　综合上述5种分析方法，geNorm程序、NormFinder程序、Delta?CT法和RefFinder程序分析结果基本一致，而BestKeeper程序分析的结果与前4种分析方法的结果存有差异，引起这些差异的原因主要是不同?程序及方法基于的数学算法不同。其中RefFinder集合了其他4种计算程序和方法（geNorm，NormFinder，BestKeeper软件以?及Delta?CT法），因此在分析内参基因稳定性时，建议