专题二微生物的培养复习教案.ppt

(1)固体培养基、液体培养基和半固体培养基 ①固体培养基：（观察菌落和分离提纯微生物） 在一般培养温度下呈固体状态的培养基。 一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基； 另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。 ②液体培养基或培养液或发酵液：（工业大规模培养 ） 呈液体状态的培养基。液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物等优点，广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。 ③半固体培养基：（观察微生物的运动）加入少量的凝固剂(如0.2％～0.5％的琼脂)而制成的培养基。这种培养基常用于观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定等。 （2）天然培养基和合成培养基 ①天然培养基：（工业生产降低成本） 主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点是成分复杂，来源受限。天然培养基/液的种类很多，包括生物性液体（如血清）；组织浸液（如胚胎浸液）；凝固剂（如血浆）等。 ②合成培养基：（菌种的分类，鉴定，营养、代谢 ，遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究）是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的。其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。 二、实 验 设 计 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 ㈢.设置对照： 二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 ◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 [三]样品的稀释 ㈣.取样涂布 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ㈣.取样涂布 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 103、104、105 放线菌 102、103、104 真菌 保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 104、105、106 细菌 目的 稀释倍数 原因：不同微生物在土壤中含量不同 ㈤.微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 课题延伸 对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生 物化学的方法。 2. 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 脲酶将尿素分解成了氨 。氨会使培养基的碱性 增强，pH升高 。因此，我们可以通过检测培养 基pH变化来判断该化学反应是否发生。 课题延伸 对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生 物化学的方法。 2. 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 脲酶将尿素分解成了氨 。氨会使培养基的碱性 增强，pH升高 。因此，我们可以通过检测培养 基pH变化来判断该化学反应是否发生。 3. 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指 示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂 将变红 ，说明该细菌能够分解尿素。 2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(