东平湖沉积物细菌多样性技术方案.ppt

一、前言 1、沉积物微生物 环境中的微生物总是通过各种信号传递、对空间和营养的相互竞争和依赖等作用而形成微生物群落。而营养物质的供给不均衡、外界环境条件的改变等因素是造成环境微生物群落变化的主要原因。沉积物是一个各种微生物丰富的、物质交换频繁的、生物活性高的特殊环境，微生物作为物质循环和能量流动的主要参与者，在沉积物生态系统中起着特别重要的作用。 2、本文选题依据及研究意义 东平湖位于山东省泰安、济宁两市的东平、梁山和汶上三县交汇地区，地处大汶河下游，黄河南岸，是山东省第二大淡水湖。其总面积627 km2，总库容近40亿m3。湖内水草生长旺盛，具有良好的水域生态环境和渔业养殖条件，其中渔业经济是沿湖人民的主要生活来源之一。在东平湖主水源入口附近，有面积为151km2左右的湿地，对湖区及其周边环境的生态有着重要的影响。 目前，对东平湖生态系统的研究主要集中在对其污染状况以及水体富营养化方面，而对其生物多样性的研究较少，尤其是在对生态系统中微生物多样性的研究方面，尚处于空白。本文对东平湖沉积物中的细菌多样性进行了调查，并结合不同环境因子的差异，采用统计学方法进一步分析和探讨了环境因子对东平湖沉积物细菌多样性的影响。为东平湖微生物生态研究提供了重要信息，为进一步从微生物角度评价东平湖生态系统提供依据。 3、技术路线 二、实验内容 东平湖部分采样点图片 分子生物学分析 1、样品总DNA的提取 样品基因组总DNA的提取、纯化使用E.Z.N. A.Soil DNA Kit进行。 2、 16S rDNA 的PCR扩增 16S rDNA片段扩增使用的上游引物为27F，下游引物为1492R；T-RFLP使用的上游引物为27F-FAM，下游引物为1492R。 3、末端限制性片段长度多态性（T-RFLP）分析 4、16S rDNA文库的构建 16S rDNA文库构建中ARDRA分型的部分电泳图谱 三、结果与分析 基于T-RFLP的细菌多样性分析 东平湖沉积物T-RFs与环境因子的CCA双序图 东平湖沉积物样品文库库容估算 东平湖沉积物细菌群落分布 东平湖沉积物中16S rDNA文库的细菌多样性指数 东平湖沉积物细菌群落相似性指数分析 东平湖沉积物样品16S rDNA文库数据与环境因子的排序分析 基于16S rDNA文库的RDA双序图 四、结论 1、分子生物学方法的比较 实验结果证明，T-RFLP数据的分析结果更全面地考查细菌群落在空间及时间上呈现的差异，而16S rDNA文库的分析结果则有利于更具体地分析沉积物中细菌群落的组成。本实验中由两种方法所得出的数据在分析过程中起到了良好的互补作用，为获得更为全面、准确的分析结果奠定了基础。 2 东平湖沉积物细菌群落结构 东平湖沉积物细菌群落主要由变形杆菌门（包括α、 β、 δ、ε和γ亚门)、酸杆菌门、浮霉菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、疣微菌门、硝化螺旋菌门、绿弯菌门、芽单胞菌门、绿菌门、蓝藻门、脱铁杆菌门、放线菌门、螺旋体门以及待划分类群OP8和OP11组成。其微生物群落结构存在着时间性和空间性差异，β-、δ-和γ-变形杆菌是沉积物中主要的优势细菌类群。 3 沉积物环境因子对细菌群落结构的影响 基于T-RFLP的CCA和基于16S rDNA文库分析的RDA都证实，沉积物中的总磷含量对其中的微生物群落结构有着重要影响。尽管尚不能明确环境因子与微生物群落间的相互作用机理，但我们的研究结果初步证实了环境因子差异与微生物群落变化之间存在的相关性，并对部分细菌群落的分布变化做出了环境解释。 研究结果表明，东平湖沉积物细菌多样性受到了人为活动的严重影响，而由此引起的对整个东平湖生态系统的影响尚需进一步考查。 在读期间发表论文 宋洪宁，杜秉海，张明岩，付伟章，路晓萌，李正华，丁延芹，2010．东平湖沉积物细菌群落结构与环境关系的研究．微生物学报 50 (8)（已录用） 路晓萌，姚良同，宋洪宁，丁延芹，侯启会，杜秉海，2010．三株芸豆叶既拮抗细菌的筛选与鉴定．生物技术通报 第8期（已录用） 致谢 感谢导师丁延芹副教授的悉心指导！ 感谢微生物系全体老师的支持与帮助！ 感谢在座的各位老师和同学！ 敬请各位老师 批评指正！ 谢谢！ * * 去除PPT模板上的--无忧PPT整理发布的文字 首先打开PPT模板，选择视图，然后选择幻灯片母版 然后再在幻灯片母版视图中点击“无忧PPT整理发布”的文字文本框，删除，保存即可 更多PPT模板资源，请访问无忧PPT网站-- 使用时删除本备注即可 ? 将此幻灯片插入到演示文稿中 将此模板作为演示文稿（