第1讲 基因工程(一轮复习).ppt

获取目的基因 （1）方法： ① 人工合成目的基因(目的基因的序列已知) ②利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因 （目的基因的序列已知） ③从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 基因DNA文库的构建 将总DNA经过多种限制酶切割，分离不同长短的DNA片段。包含的基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体上便构成了该生物的基因文库。 5、某线性DNA分子含有5000个碱基对（bp），先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如下图所示。下列有关说法不正确的是（ ） A．在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列分别有3个和2个 B．a酶与b酶切出的粘性末端不能相互连接 C．a酶与b酶切断的化学键相同 D．用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后， 序列会明显增多 7、限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后。用凝胶电泳分离各核酸片段，实验结果如图所示：（ ） 请问：3种不同的限制性内切酶在此DNA片段上相应切点的位置是 思考:用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma I切割，原因是 什么？ DNA连接酶与DNA聚合酶的作用异同？ 相同点：都能形成磷酸二酯键 不同点： 1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2） DNA聚合酶需要以DNA链为模板； 而DNA连接酶不需要模板。 拓展讨论 （2010年浙江卷） 2．在用基因工程技术构 建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错 误的是( ) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的 核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因 和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞。 A 感受高考 （2011年浙江卷）6、将ada（腺苷酸脱氨酶基因） 通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸 脱氨酶。下列叙述错误的是（ ） A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶 识别位点 C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一 个ada D. 每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 C （天津改编）在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。 1、A过程需要的酶有_________________________ 。 2、B过程及其结果体现了质粒作为载体DNA必须具备的两个条件是______ 。 3、C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入____ 。 4、如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用__________ 作为探针。 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 标记基因；在宿主细胞复制并稳定保存 卡那霉素 放射性标记的抗虫基因（或荧光分子） 为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因 导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植 酸酶基因的流程。据图分析下列说法错误的是( ) A．图中基因组文库等于cDNA文库。 B．B过程需要的酶是逆转录酶。 C．从基因文库中可获取我们想要的植酸酶基因。 D．A、C过程依据的原理是碱基互补配对原则。 B A C A C A. 0.3 0.7 2.6 0.9 0.5 1.2 A B C A B B. 0.3 0.7 2.6 0.9 0.5 1.2 A B C B C C. 0.3 0.7 2.6 0.9 0.5 1.2 A B C A C D. 0.3 0.7 2.6 0.9 0.5 1.2 限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现以3种不同的限制性内切酶对6.2kb大小的线状DNA进行剪切后。用凝胶电泳分离各核酸片段，实验结果如图所示。请问：3种不同的限制性内切